研究銀合歡葉黃酮最佳提取工藝。采用單因素和正交試驗(yàn)選出銀合歡葉黃酮最佳提取工藝。確定銀合歡葉黃酮最佳提取工藝參數(shù)為：溫度40 ℃，提取時(shí)間20 min，料液比1 ∶ 25；乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)50 %。在此條件下黃酮的提取率可達(dá)到2.052 %。

關(guān)鍵詞：銀合歡葉；正交實(shí)驗(yàn)；黃酮；提取工藝

銀合歡為豆科（Leguminosae）含羞草亞科（Mimosoideae）銀合歡屬（Leucaena Bentham）多年生灌木或喬木，原產(chǎn)美洲，現(xiàn)廣泛分布于世界熱帶亞熱帶地區(qū)[1]，目前，我國(guó)栽培利用的主要品種是銀合歡[L. leucocephala（Lamarck）de Wit]，該品種適應(yīng)性強(qiáng)、速生高產(chǎn)、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、適口性好、易于栽培。合歡葉有安神解郁、活血消腫、用于心神不安、憂郁失眠、癰瘡腫毒、筋骨折傷，還具有吸收空氣中硫氧化物的作用，因而它能夠凈化空氣、美化環(huán)境，是調(diào)節(jié)人們精神生活的優(yōu)良樹種[2]。銀合歡葉含有黃酮、生物堿、揮發(fā)油等多種化學(xué)成分[3]。李學(xué)堅(jiān)等進(jìn)行了銀合歡葉提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的降血糖效果的研究，可望使銀合歡葉成為開發(fā)降血糖藥物的資源[4]。近年來，銀合歡葉資源化利用研究漸成熱點(diǎn)[4-6]，但鮮見測(cè)定銀合歡葉黃酮含量的報(bào)道。黃酮類化合物廣泛存在于自然界植物中，大部分具有較強(qiáng)的抗氧化活性，能起到廣譜抑菌、消炎和抗毒素的作用[7]。植物中黃酮化合物以其純天然、高活性、見效快等特點(diǎn)得到國(guó)內(nèi)外科研人員的極大關(guān)注，目前已開發(fā)了多種藥用植物黃酮產(chǎn)品。因此，研究從銀合歡葉中提取黃酮類化合物對(duì)銀合歡的開發(fā)利用具有重要意義。論文對(duì)銀合歡葉的黃酮提取工藝進(jìn)行了探索和優(yōu)化，從溶劑的濃度、提取時(shí)間、提取溫度和料液比的單因素實(shí)驗(yàn)，以及正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行考察研究，找到銀合歡葉黃酮提取的最優(yōu)工藝，為銀合歡葉黃酮的工業(yè)化生產(chǎn)提供實(shí)驗(yàn)參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

DF-101S 集熱磁力加熱攪拌器：金壇市醫(yī)療儀器廠；SHB-Ⅲ循環(huán)式多用真空泵：鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；電子天平：上海菁海儀器有限公司；SENCO RW2-180SP：上海申生科技有限公司； 722N 可見分光光度計(jì)：上海精密科學(xué)儀器有限公司；KQ3200DE 型數(shù)控超聲波清洗器：昆山超聲儀器有限公司；KQ-C 玻璃儀器氣流烘干器：鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；SK1517電熱鼓風(fēng)干燥箱：上海一恒科學(xué)儀器有限公司；標(biāo)準(zhǔn)

檢驗(yàn)篩：上虞市儀器設(shè)備廠。銀合歡葉樣品于2012 年10 月中旬采自新疆阿拉爾塔里木大學(xué)校園，銀合歡葉采集后清洗干凈、晾干、粉碎并過40 目篩，收集備用。蘆丁對(duì)照品（生物純純度≥95 %，上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司）；無水乙醇、硝酸鋁、氯仿（均為分析純）、亞硝酸鈉（化學(xué)純）、蒸餾水。

1.2 方法

1.2.1 溶液的制備

1.2.1.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取60 ℃ 減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品20.0 mg，用30 %的乙醇定容于100 mL 容量瓶中，制成濃度為0.2 mg/mL 的對(duì)照品溶液。

1.2.1.2 工藝流程

銀合歡葉粉末→醇提（兩次）→合并濾液→過濾→濃縮→少量水分散，氯仿萃取（除去葉綠素等脂溶性雜質(zhì)）→過濾→濃縮→30 %乙醇溶解→過濾并定容→測(cè)定。

1.2.1.3 樣品溶液的制備

稱取銀合歡樹葉粉末1.00 g，置于250 mL 圓底燒瓶中，按“1.2.1.1”方法在一定的乙醇濃度、提取溫度、提取時(shí)間、料液比條件下進(jìn)行提取，濾液過濾定容于

25 mL 容量瓶中，即得。

1.2.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇精密量取“1.2.1.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液4.00 mL 于25 mL容量瓶中，加30%乙醇至10 mL，加入5 % NaNO20.7mL 搖勻，放置6 min，加入10%Al （NO3 ）3 溶液0.7mL，搖勻，放置6 min，加入4 % NaOH 溶液5 mL，再加30 %乙醇至刻度，搖勻，放置15 min，在400 nm~750 nm 處掃描，結(jié)果對(duì)照品溶液在508 nm 處具有最大吸收。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制[8]

精密量取“1.2.1.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL 于25 mL 容量瓶中，加30 %乙醇至10 mL，加入5 % NaNO2 0.7 mL，搖勻，放置6 min，加入10 % Al（NO3）3 溶液0.7 mL，搖勻，放置6 min，加入4 %NaOH 溶液5 mL，再加30 %乙醇至刻度，搖勻，放置

15 min，在508 nm 處，測(cè)定吸收度值。以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4 樣品溶液的測(cè)定

移取“1.2.1.3”項(xiàng)下樣品溶液1 mL 于25 mL 容量瓶中，按“1.2.3”方法測(cè)定樣品的吸光度，從工作曲線中查出黃酮濃度，由此計(jì)算出黃酮得率。

黃酮得率=（CV1V0 /V2W×103）×100 %式中：C 為標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的濃度，（mg/mL）；V0為黃酮初提液定容后的體積，mL；V1 為提取液測(cè)定時(shí)定容后的體積，mL；V2 為提取液測(cè)定時(shí)的體積，mL；W為葉子干粉的質(zhì)量，g。

1.2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

為驗(yàn)證選定的最佳提取工藝的重復(fù)性，分別稱取6 份銀合歡葉粉末1.00 g，以最佳提取工藝進(jìn)行6 次平行試驗(yàn)，按“1.2.1.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，移取1.00 mL 于25 mL 容量瓶中，顯色，測(cè)定。

1.3 單因素實(shí)驗(yàn)

稱取銀合歡樹葉粉末1.00 g，精密稱量，置于250mL圓底燒瓶中，在不同條件下提取，考察不同提取時(shí)間、乙醇濃度、料液比和提取溫度對(duì)銀合歡葉中黃酮提取效果的影響。

1.4 正交實(shí)驗(yàn)

通過單因素試驗(yàn)對(duì)銀合歡葉黃酮的提取條件進(jìn)行初步研究，，發(fā)現(xiàn)各條件對(duì)銀合歡葉黃酮的提取率均有一定的影響，選擇L9 （ 34）表安排正交試驗(yàn)，優(yōu)化銀合歡葉葉黃酮提取工藝。試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。