目的：觀察針灸對大鼠海馬細胞凋亡指標的影響，以期為針灸的功效提供了理論依據(jù)。方法：SD大鼠36只分為3組，正常對照組、疲勞模型組、針灸組。除正常對照組以外其余兩組均進行運動跑臺訓練，針灸組接受針灸。運動結(jié)束后，大鼠取海馬檢測。結(jié)果：與疲勞模型組相比，針灸組海馬組織的總抗過氧化能力（T-AOC）和乙酰膽堿脂酶（AChE）增強，丙二醛（MDA）和凋亡相關(guān)蛋白3（Caspase-3）陽性細胞數(shù)和陽性面積比減少。結(jié)論：針灸足三里能夠增加大鼠海馬的總抗氧化能力，減少MDA含量，阻止Caspase-3的活化，最終達到對抗細胞凋亡的目的。

關(guān)鍵詞：運動性疲勞；針灸；中樞

運動性疲勞的定義為[1]：“機體生理過程不能持續(xù)其機體在特定水平上或不能維持預定的運動強度”。如何有效改善運動所致的疲勞狀況一直是運動醫(yī)學界研究的重要內(nèi)容之一。運動疲勞中的中樞疲勞成為近年來神經(jīng)科學和運動醫(yī)學的研究熱點。運動性疲勞屬于中醫(yī)“勞倦”的范疇，是一種亞健康狀態(tài)或疾病狀態(tài)，主要是由于體力過用、饑飽失常、情志過極等因素損傷臟腑氣血，形成虛損勞傷等病變所致機體各種復雜內(nèi)在變化的一種綜合外在表現(xiàn)。近十幾年來，針灸在治療和改善運動性疲勞方面，取得了很大突破[2]。但是關(guān)于針灸對運動性疲勞中樞系統(tǒng)的研究，國內(nèi)仍處于起步階段。本實驗以中醫(yī)理論為基礎，觀察針灸干預對運動性疲勞大鼠海馬結(jié)構(gòu)功能各方面的影響，從而對針灸治療該病癥提供理論和實踐依據(jù)。

材料與方法

1. 動物 SPF級雄性SD大鼠36只，體質(zhì)量180-220g，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，實驗動物使用許可證號：SYXK（粵）2008-0085。

2. 試劑與儀器 羊抗大鼠凋亡相關(guān)蛋白3（Caspase-3）多克隆抗體，武漢博士德公司，生產(chǎn)批號：990126；兔抗羊IgG、S -P免疫組化染色試劑盒，DA B顯色試劑盒，北京博奧森公司，生產(chǎn)批號：07360 0；丙二醛（MDA）含量、總抗過氧化能力（T-AOC）、乙酰膽堿脂酶（AChE）測定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供，生產(chǎn)批號：097316。ZH-PT動物實驗跑臺，淮北正華生物儀器設備有限公司；JJ-1型組織勻漿機，深圳天南海北公司；T DL -5 -A型低速離心機，上海金鵬分析儀器有限公司；3K30G型Sigma超速冷凍離心機，Sigma公司；722分光光度計，上海精密科學儀器公司；HH- 6型數(shù)顯恒溫水浴鍋，金壇市高華儀器有限公司，上海精密科學儀器公司；RM2135型輪轉(zhuǎn)式切片機、CM1850冷凍切片機、TP1020全自動組織脫水機、EG1140石臘包埋機、HI1210攤片機和HI1220烘片機，德國萊佧；Olympus光學顯微鏡及病理圖像采集系統(tǒng)，日

本Olympus；Image ProPlus 5.1病理圖像分析系統(tǒng)，美國MediaCybernetics公司。

3. 分組與方法 36只大鼠隨機分為3組，正常對照組、疲勞模型組、針灸組。除正常對照組外，其他2組均行跑臺訓練，針灸組實驗方法如下：取穴依據(jù)：“足三里穴主五勞贏瘦，七傷虛乏”善補益扶正，能促進增強機體各種特異性和非特異性免疫功能。定位及針刺深度：足三里穴取膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，腓骨下頭5mm，直刺6mm。針刺方法：采用平補平瀉針法治療，每日1次，每次留針20min，每隔10min行針1次，連續(xù)施針14d。訓練方案

是根據(jù)Bedford理論設計[3]坡度0°。跑速為15m/min，每次先跑20min，間歇40min，再跑20min，每周7次，連續(xù)2周。

4. 檢測指標

4.1 海馬抗氧化能力的測定 取材處理后，T-AOC測定用紫外分光光度法，MDA含量測定用TBA反應比色法。

4.2 ACh E活性的檢測 海馬制備成10％的組織勻漿，2 500r/min離心10min，取上清液置４℃?zhèn)溆?。取上清液，采用酶?lián)免疫法吸附試驗（ELISA）方法檢測AChE活性

4.3 Caspase-3表達的測定 每組取3只大鼠，腹腔麻醉，灌注，分離出海馬后，包埋切片，使用Image ProPlus 5.1病理圖像分析系統(tǒng)采集照片，每只動物各選3張切片，每張切片隨機選取10個視野。以海馬部分細胞中出現(xiàn)棕色顆粒為陽性信號，觀察并對陽性細胞數(shù)進行計數(shù)分析（每10個觀察細胞中陽性細胞所占比例）。測定表達的陽性面積與總面積的比值。

5. 統(tǒng)計學方法 計量資料以x-±s表示，多組間均值的比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），上述由SPSS 13.0統(tǒng)計軟件完成。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。