實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在離心時(shí)間為４ｍｉｎ時(shí)，轉(zhuǎn)速超過１?。担埃埃颍恚椋顣r(shí)，分離度保持在０．８９左右，繼續(xù)提高轉(zhuǎn)速，對于分離度幾乎沒有改變，故離心強(qiáng)度選擇為１　５００ｒ／ｍｉｎ。

２．３．２　離心時(shí)間對分離度的影響

精密稱取大黃酚３．０ｍｇ，置于２５ｍＬ容量瓶中，用制得的空白脂質(zhì)體溶液稀釋至刻度，在超聲波中超聲混合均勻，備用。分別取上述混合液

３ｍＬ，置７支離心管中，轉(zhuǎn)速為１?。担埃埃颍恚椋睿謩e離不同時(shí)間后，去除上清液層，移取５ｍＬ甲醇加入上述７支離心管中，使沉淀溶解，４２８ｎｍ 處測定紫外吸收吸光度Ａ 值，再根據(jù)上述公式計(jì)算出大黃酚的含量以及相應(yīng)的離心度，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表３。結(jié)果表明在轉(zhuǎn)速為１?。担埃埃颍恚椋?、離心時(shí)間１２０ｓ時(shí)，基本達(dá)到離心平衡，繼續(xù)延長離心時(shí)間，析出沉淀幾乎無變化，故選離心時(shí)間為１２０ｓ。

表３　離心時(shí)間的選擇數(shù)據(jù)表

Ｔａｂｌｅ　３?。裕瑁濉。悖瑁铮椋悖濉。铮妗。悖澹睿簦颍椋妫酰纾幔臁。簦椋恚?

Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ?。簦椋恚澹蟆。常啊。叮啊。梗啊。保玻啊。保担啊。保福啊。玻保?

Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ?。玻埃常啊。玻保保础。玻保梗埂。玻罚埃础。玻罚埃础。玻罚埃础。玻叮玻?

Ｄｒｕｇ?。悖铮睿簦澹睿簦恚纭。埃玻础。埃玻怠。埃玻丁。埃常病。埃常病。埃常病。埃常?

Ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ?。颍幔簦椋铮?０．６７?。埃叮埂。埃罚病。埃福埂。埃福埂。埃福埂。埃福?

２．３．３　分離度重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

為了考察低速離心法對空白脂質(zhì)體和游離大黃酚分離作用效果如何，我們精密稱取大黃酚１．０ｍｇ，移取空白脂質(zhì)體２ｍｌ，超聲波混合均勻，再在１?。担埃埃颍恚椋铍x心條件下離心１２０ｓ，去除上層清液，用適量甲醇溶解沉淀后，置于４２８ｎｍ處測定紫外吸收，根據(jù)測定Ａ 值計(jì)算沉淀的大黃酚質(zhì)量，平行操作３次，計(jì)算出沉淀的大黃酚量分別占投藥總量平均比例，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表４。由表４可知，該離心條件能使脂質(zhì)體中游離的大黃酚平均分離度達(dá)到９０％左右。表４　分離度重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Ｔａｂｌｅ　４?。裕瑁濉。颍澹穑澹幔簦澹洹。澹穑澹颍椋恚澹睿簟。颍澹螅酰欤簦蟆。铮妗。螅澹穑幔颍幔簦椋睿纭。颍幔簦椋?

Ｎｏ． １?。病。?ＭｅａｎＳｅｐａｒａｔｉｎｇ?。颍幔簦椋铮?８８．７８　８９．２９?。梗保保怠。福梗罚?

２．４　大黃酚包封率的測定

參考王永利等人的測定方法，將制得的大黃酚脂質(zhì)體全部轉(zhuǎn)移至１０ｍＬ容量瓶中，用Ｔｒｉｓ緩沖液（ｐＨ＝８．２）定容，混合均勻。然后精密量?。玻?ｍＬ 置于離心管中，在離心機(jī)上以１?。担埃埃颍恚椋畹霓D(zhuǎn)速條件下，離心分離１２０ｓ，棄去上層清液。精密?。担埃埃恚碳状?，溶解沉淀，以甲醇做參比測定吸光度Ａ，根據(jù)上述線性標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式計(jì)算２．０ｍＬ大黃酚脂質(zhì)體中游離大黃酚的含

量。用下式計(jì)算包封率：包封率＝（１－ＷｆｒｅｅＷｔｏｔａｌ）×１００％［１］上式中Ｗｔｏｔａｌ為大黃酚的總量，Ｗｆｒｅｅ

為游離的大黃酚質(zhì)量，單位均為μｇ。重復(fù)測定３次，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果列入表５。由表５可知，按本方法制得的大黃酚脂質(zhì)體的包封率平均為８２．８７％，高于２０１０版《中華人民共和國藥典》中有關(guān)“脂質(zhì)體包封率大于８０％”的規(guī)定。

表５　大黃酚包封率的測定結(jié)果

Ｔａｂｌｅ?。怠。裕瑁濉。洌澹簦澹颍恚椋睿幔簦椋铮睢。颍澹螅酰欤簦蟆。铮?

ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ?。澹妫妫椋悖椋澹睿悖。妫铮颉。悖瑁颍螅铮穑瑁幔睿铮臁。欤椋穑铮螅铮恚澹?

Ｎｏ． Ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ?。澹妫妫椋悖椋澹睿悖?

１　８２．２９

２?。福常玻?

３?。福常埃?

Ｍｅａｎ?。福玻福?

３　分析與討論

脂質(zhì)體包封率的測定是脂質(zhì)體質(zhì)量評定的重要指標(biāo)，因此，選擇一種快速、簡單且適合大黃酚包封率的測定方法非常重要。包封率系指包入脂

質(zhì)體內(nèi)的藥物量與體系總藥物量的百分比，一般采用重量包封率。測定包封率時(shí)需要分離載藥脂質(zhì)體和游離藥物，脂質(zhì)體包封率的測定方法有多

種，邵紅霞等人［９］列舉了１０種方法，但是不是每一種方法都適合所有的脂質(zhì)體，故在考察脂質(zhì)體的包封率時(shí)，只有通過理論和實(shí)驗(yàn)選擇合適的測定方法，測出的包封率才有意義。目前常用的脂質(zhì)體包封率的測定方法有：葡聚糖凝膠法、超速離心法、透析法等［４－５］。葡聚糖凝膠法是利用含藥脂質(zhì)體和游離藥物的分子量的大小不同從而分離載藥脂質(zhì)體和游離藥物，但該法操作復(fù)雜且耗時(shí)長［７］。超速離心法是根據(jù)載藥脂質(zhì)體與游離藥物在同樣離心條件下的沉降速度不同而進(jìn)行分離的，但是在超速離心的條件下，含藥脂質(zhì)體可能會和游離藥物一起沉淀下來，無法使其分離。透析法適合于分析小分子的物質(zhì)，所需設(shè)備也不復(fù)雜昂貴，能除去幾乎所有的游離藥物，但是，透析時(shí)間太長且易發(fā)生藥物的滲漏，因此，不作為脂質(zhì)體包封率測定的首選方法。鑒于上述各種方法的缺陷，建立一種簡單、快速、可靠且適用于脂溶性藥物包封率測定的方法十分必

要。本實(shí)驗(yàn)采用的是低速離心法，是根據(jù)脂質(zhì)體與游離藥物的比重不同，其所受離心力不同，從而沉降速度不同，而達(dá)到分離的目的。該方法的關(guān)

鍵在于離心轉(zhuǎn)速和離心時(shí)間的確定，離心轉(zhuǎn)速過高會將載藥脂質(zhì)體和游離藥物共同沉淀下來，離心轉(zhuǎn)速過低，會使游離藥物沉降不完全，難以達(dá)到

分離的目的。本實(shí)驗(yàn)所采用的低速離心法與王永利等［８］采用的實(shí)驗(yàn)方法類似，離心速度控制在１?。担埃埃颍恚椋?，離心１２０ｓ，操作方法較王永利等［８］的方法更簡單，同時(shí)也能達(dá)到空白脂質(zhì)體與游離大黃酚很好的分離（分離度接近９０％）。該法具有操作簡單、儀器要求低等優(yōu)點(diǎn)。

４　結(jié)論

水不溶性藥物在水介質(zhì)中，未被脂質(zhì)體包封的藥物常以微粒的形式存在，使得傳統(tǒng)的脂質(zhì)體藥物包封率測定方法無法使用，本實(shí)驗(yàn)通過前期的低速離心法的建立，對低速離心的條件進(jìn)行了摸索，最后確定了離心條件為１?。担埃埃颍恚椋?、離心時(shí)間為１２０ｓ可將載藥脂質(zhì)體與游離藥物有效地分離，測得３批大黃酚脂質(zhì)體的包封率分別為８２．２９％，８３．２５％和８３．０６％，符合２０１０版《中華人民共和國藥典》中有關(guān)“脂質(zhì)體包封率大于８０％”的規(guī)定。