目前熒光分析技術(shù)在生物化學(xué)、藥物分析、食品檢驗(yàn)、醫(yī)療衛(wèi)生、環(huán)境科學(xué)和生命科學(xué)研究等各個領(lǐng)域得到極其廣泛的應(yīng)用,熒光分光光度計(jì)的使用越來越普及。紫外-可見分光光度法是一種歷史悠久,傳統(tǒng)的分析方法,通常需要相應(yīng)的紫外-可見分光光度計(jì)。已有文獻(xiàn)報道利用熒光分光光度計(jì)實(shí)現(xiàn)紫外-可見分光光度計(jì)功能的實(shí)驗(yàn)方法,但需要有專門制作的附件。本文提出在熒光分光光度計(jì)上實(shí)現(xiàn)紫外-可見分光光度計(jì)功能的簡易新方法,即利用白紙片改變光路,使熒光分光光度計(jì)實(shí)現(xiàn)紫外-可見分光光度計(jì)的功能。實(shí)驗(yàn)室自制MYF多功能熒光分光光度計(jì)或日立F-4500 熒光分光光度計(jì);日立DU-7400 紫外- 可見分光光度計(jì)或島津UV-2501PC紫外-可見分光光度計(jì),UV-2501PC型帶有反射測量附件。透光物質(zhì)在熒光分光光度計(jì)樣品架位置以適當(dāng)?shù)慕嵌确胖冒准堃粡?,使反射或散射光能進(jìn)入發(fā)射單色器。若待測物為如濾光片之類的可支持物,直接立于光路中即可;若為溶液,則需置于樣品池再放入光路中。待測樣品置于激發(fā)單色儀和白紙之間,亦可置于白紙與發(fā)射單色儀之間。設(shè)置實(shí)驗(yàn)參數(shù),以波長差Δλ=0nm進(jìn)行同步掃描,以未放入待測物時掃描所獲得數(shù)據(jù)作為白紙空白,再放入待測物,所得到的光譜數(shù)據(jù)與白紙空白相除進(jìn)行校正,即可獲得在熒光儀上待測物的透射光譜,根據(jù)需要可再轉(zhuǎn)換為吸收光譜。
不透光物質(zhì)掃描不透光物質(zhì)的反射光譜時,取走白紙,將樣品以適當(dāng)?shù)慕嵌确胖糜贒位置,仍以Δλ=0nm進(jìn)行同步掃描,所得結(jié)果仍與白紙空白相除進(jìn)行校正以獲得其反射率的譜圖。 結(jié)果及討論:熒光分光光度計(jì)的光路為直角構(gòu)型,在光路中放入白紙,起了將入射光或經(jīng)樣品吸收后的透射光導(dǎo)入檢測器的作用,導(dǎo)入光的光強(qiáng)與入射光或透射光成正比。故實(shí)驗(yàn)部分所介紹的方法(我們稱之為紙片導(dǎo)光法)可用于在熒光分光光度計(jì)上實(shí)現(xiàn)吸收光譜的快速測量。分別選擇對不同波長具有吸收的濾光片A(長波通)和B(短波通)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并對同一濾光片亦用紫外- 可見分光光度計(jì)檢測其透射率,結(jié)果顯示:對于同一濾光片進(jìn)行掃描,熒光儀的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和紫外-可見分光光度計(jì)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,兩種方法測得的透射光譜相當(dāng)吻合。另外,利用該法在熒光分光光度計(jì)上可以很方便地得到在可見光區(qū)域的不透光物質(zhì)的反射光譜。而如果要在紫外-可見分光儀上獲得不透光固體樣品的反射譜的實(shí)驗(yàn),則需要專門的檢測附件。我們?nèi)〔げ巳~片和蘋果皮進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。利用本方法和利用紫外-可見分光光度計(jì)所得的反射譜峰基本對應(yīng),目前該方法用于測量不透光固體物質(zhì)的紫外反射情況,仍存在較大誤差,原因可能由于紫外信號弱,白紙校正不適合等問題。盡管如此,熒光分光光度計(jì)用來定性比較不同樣品的反射光譜仍不失其現(xiàn)實(shí)意義。
以上結(jié)果表明,利用紙片導(dǎo)光法可以在熒光分光光度計(jì)上實(shí)現(xiàn)紫外-可見分光光度計(jì)測試物質(zhì)吸收曲線的功能,方法簡單易行,特別是用來檢測如濾光片,葉片等固體物質(zhì),無需添加任何其它附件,即可方便地獲得它們的透射光譜和反射光譜。