幾丁質(zhì)是一種天然無(wú)毒性且廣泛存在的生物大分子，在蝦蟹等甲殼類生物和昆蟲(chóng)的外殼及大多數(shù)真菌的細(xì)胞壁內(nèi)都有發(fā)現(xiàn)。其結(jié)構(gòu)類似纖維素，是由β-1，4-糖苷鍵連接起來(lái)的n-乙酰-d-葡萄糖胺直鏈高聚物，是地球上僅次于植物纖維的第二大生物資源。但由于幾丁質(zhì)化學(xué)性質(zhì)十分穩(wěn)定，溶解性較差，其應(yīng)用受到限制。為了擴(kuò)大幾丁質(zhì)的應(yīng)用范圍增加產(chǎn)品的附加值，需要對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步加工，近年來(lái)研究的熱點(diǎn)為降解幾丁質(zhì)為幾丁寡糖。目前降解幾丁質(zhì)制備幾丁寡糖的方法主要有化學(xué)法、物理法和生物法。其中，可降解幾丁質(zhì)的微生物數(shù)量和種類有限，且尚未有報(bào)道說(shuō)明貪噬菌可降解幾丁質(zhì)。如果能提供一株具有降解幾丁質(zhì)的貪噬菌，將具有重大的科研和應(yīng)用價(jià)值。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一株貪噬菌及其應(yīng)用。該貪噬菌可降解幾丁質(zhì)，還具有植物促生作用，可防治植物病害，還具有一定的溶磷作用，可改善土壤質(zhì)量。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一株貪噬菌，于2019年8月19日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為：cgmccno.1.16908。相應(yīng)的，一株貪噬菌，其16srna如seqidno1所示。相應(yīng)的，一株貪噬菌，其菌落不透明，邊緣規(guī)則，表面光滑，呈淡黃色狀態(tài)，為革蘭氏陰性菌，個(gè)體形態(tài)呈短桿狀，無(wú)鞭毛、無(wú)芽孢生成。相應(yīng)的，所述貪噬菌在降解纖維素中的應(yīng)用，所述應(yīng)用的ph為3～10，溫度為10～37℃。相應(yīng)的，所述貪噬菌在降解幾丁質(zhì)中的應(yīng)用，所述應(yīng)用的ph為3～10，溫度為10～37℃。相應(yīng)的，所述貪噬菌在改善土壤土質(zhì)中的應(yīng)用，所述應(yīng)用的ph為3～10，溫度為10～37℃。相應(yīng)的，所述貪噬菌在抑制植物病蟲(chóng)害或病原菌中的應(yīng)用，所述應(yīng)用的ph為3～10，溫度為10～37℃。優(yōu)選的，所述植物病原菌包括番茄早疫病菌、禾谷鐮刀菌、小麥絲核菌。優(yōu)選的，所述病蟲(chóng)害包括水稻蠕蟲(chóng)。相應(yīng)的，所述貪噬菌在提高植物免疫能力中的應(yīng)用，所述應(yīng)用的ph為3～10，溫度為10～37℃。本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明提供了一種全新的貪噬菌，是未被發(fā)表過(guò)的一個(gè)新種。該貪噬菌具有優(yōu)異的降解纖維素的能力和降解幾丁質(zhì)的能力。在農(nóng)作物種植上，所述貪噬菌可提高植物的免疫能力，對(duì)農(nóng)作物生長(zhǎng)具有明顯的促生作用。另外，研究還發(fā)現(xiàn)，所述貪噬菌對(duì)包括番茄早疫病菌在內(nèi)的多種植物病原菌和植物病蟲(chóng)害具有明顯抑制作用，可進(jìn)一步提高農(nóng)作物產(chǎn)量。同時(shí)，所述貪噬菌還可針對(duì)性將難溶性磷酸鹽轉(zhuǎn)化為可溶性磷酸鹽，從而改善因化肥施用過(guò)多等原因而板結(jié)的土壤的土質(zhì)情況。經(jīng)過(guò)測(cè)試和檢驗(yàn)，該貪噬菌在多方面均具有優(yōu)異或良好的應(yīng)用效果和應(yīng)用潛力。附圖說(shuō)明圖1為cy25r-8菌的菌落形態(tài)圖；圖2為cy25r-8菌的個(gè)體形態(tài)圖；圖3為cy25r-8菌的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)示意圖；圖4為cy25r-8菌降解纖維素效果示意圖；圖5為n-乙酰d-氨基葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖6為cm134l-2菌抑制番茄早疫病病原菌生長(zhǎng)示意圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明使用的培養(yǎng)基如下：1、富集培養(yǎng)基：(1)溶液1:0.1％二水檸檬酸鈉、0.6％k2hpo4、1.4％kh2po4、0.2％(nh4)2so4。需要說(shuō)明的是，培養(yǎng)基中的“％”指溶質(zhì)溶解于水中的w/v比，例如，“0.1％”具體指100ml水中含有0.1g對(duì)應(yīng)物質(zhì)，其余培養(yǎng)基中，無(wú)特別說(shuō)明則與此相同。(2)溶液2：0.02％mgso4·7h2o。(3)溶液3:1.1％α-幾丁質(zhì)粉末溶液。(4)將上述三種溶液按體積比為89:1:10比例混合，即得所需的富集培養(yǎng)基。2、羧甲基纖維素培養(yǎng)基(cmc)：1％羧甲基纖維素鈉(cmc-na)、0.1％k2hpo4、0.05mg2so4、0.05％nacl、1％蛋白胨、0.025％(nh4)2so4。3、胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基(tsb)：1.7％胰蛋白胨，0.3％大豆蛋白胨，0.5％氯化鈉，ph＝7.0～7.2。4、胰蛋白胨大豆肉湯瓊脂培養(yǎng)基(tsa)：1.7％胰蛋白胨，0.3％大豆蛋白胨，0.5％氯化鈉，1.8％瓊脂，ph＝7.0～7.2。去除tsa中的瓊脂，即得對(duì)應(yīng)的液體培養(yǎng)基tsb。5、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(pda)：馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂18g，蒸餾水1000ml，自然ph值，115℃滅菌30min。6、無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基(pko培養(yǎng)基)：葡萄糖10g，磷酸三鈣5g，硫酸銨0.5g，氯化鈉0.3g，氯化鉀0.3g，七水合硫酸鎂0.3g，硫酸錳0.03g，七水合硫酸亞鐵0.03g，酵母膏0.5g,蒸餾水1000ml，ph＝7.0～7.5。121℃滅菌，20min。7、幾丁質(zhì)固體培養(yǎng)基：所述幾丁質(zhì)固體培養(yǎng)基的制備方法為：將溶液a50ml、溶液b50ml、100倍的微量金屬溶液10ml,100倍的維生素混合溶液10ml，酵母提取物1.0g,膠體幾丁質(zhì)10g,瓊脂18g,加蒸餾水至1000ml，控制ph＝7.0～7.2，混勻待其凝固即可。所述膠體幾丁質(zhì)的制備方法為：稱取10g片狀幾丁質(zhì)于三角瓶中，加入200ml濃鹽酸，在磁力攪拌器上攪拌過(guò)夜，然后用4℃的水進(jìn)行水合沉淀，4000r/min離心10min，隨后用4℃純水洗滌至ph為中性，即得。各溶液的具體組分如表1所示。表1幾丁質(zhì)固體培養(yǎng)基中各溶液成分表8、幾丁酶誘導(dǎo)培養(yǎng)基：在所述富集培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，增加1％的多聚蛋白胨、1％的酵母提取物。下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的闡釋。實(shí)施例一：菌株cy25r-8的分離和篩選1、樣品采集及預(yù)處理。本發(fā)明所使用的菌株由中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所從四川省成都市雙流縣中農(nóng)業(yè)示范基地(102°54′～104°53′e，30°05′～31°26′n)中的川育25號(hào)小麥根中取樣。將采取的小麥根樣品放入保鮮袋中，立即送入實(shí)驗(yàn)室處理。到實(shí)驗(yàn)室后，將采集的樣品用自來(lái)水沖洗干凈，再用無(wú)菌水洗滌，自然陰干。將陰干后的植物組織剪成2～3㎜的小段，用體積分?jǐn)?shù)為2～3％的次氯酸鈉溶液浸泡5min，取出后用無(wú)菌水沖洗5次，將最后一次的洗滌水涂布在pda平板上，于37℃培養(yǎng)兩天，若無(wú)菌生長(zhǎng)，說(shuō)明表面消毒徹底，可以開(kāi)始對(duì)小麥根組織進(jìn)行菌株富集與分離。2、菌株富集與純化。將10g小麥的表面滅菌根組織與100ml富集培養(yǎng)基混勻，于28℃下培養(yǎng)7天。隨后取富集培養(yǎng)的培養(yǎng)液300ul于3ml的滅菌后的tsb培養(yǎng)基里，按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6進(jìn)行梯度連續(xù)稀釋，然后取200μl最小稀釋梯度的培養(yǎng)液，涂布于幾丁質(zhì)固體培養(yǎng)基上，做三個(gè)平行。將涂布好的各平板置于28℃培養(yǎng)2～3天，獲得一株亮黃色菌落，命名為cy25r-8。然后再使用tsa(平板)進(jìn)一步純化2～3次該菌落，最后在含有20％(v/v)甘油作為保護(hù)劑的tsb中凍存于-80℃環(huán)境中。實(shí)施例二：菌株cy25r-8的鑒定1、分子水平鑒定利用細(xì)菌基因組快速提取試劑盒提取菌株cy25r-8的dna。選用細(xì)菌通用引物，對(duì)其16srrna基因進(jìn)行擴(kuò)增，引物序列如下：27f:5′-agagtttgatc(c/a)tggctcag-3′；1492r:5′-tacgg(c/t)taccttgttacgactt-3′。所述引物27f/1492r的合成、2×tappcrmastermix均購(gòu)自生工生物(上海)有限責(zé)任公司。pcr擴(kuò)增程序：95℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，55℃復(fù)性30s，72℃延伸90s，29個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸5min。pcr產(chǎn)物經(jīng)1.0％瓊脂糖電泳，核酸染料染色后熒光可見(jiàn)光凝膠成像分析系統(tǒng)檢測(cè)。得到的16srrna基因片段，通過(guò)膠回收純化，puc-tm載體連接，dh5α轉(zhuǎn)化，陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子經(jīng)一代測(cè)序，獲得其16srrna基因的序列，如seqidno1所示。將獲得的序列在genbank中使用blast程序(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/blast.cgi)與ezbiocloud數(shù)據(jù)庫(kù)可利用的序列進(jìn)行比較，確定其進(jìn)化關(guān)系。運(yùn)用neighbour-joining法在mega7.0中構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)，進(jìn)化樹(shù)的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)通過(guò)自舉分析測(cè)試法基于1000次重復(fù)進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果如圖3所示。經(jīng)數(shù)據(jù)庫(kù)序列對(duì)比，與cy25r-8親緣關(guān)系最近的模式菌株為variovoraxparadoxusnbrc15149t，v.guangxiensisdsm27352t，v.gossypiijm-310t和v.boronicumulansbam-48t，其同源相似性為99.04～99.59％，同時(shí)，cy25r-8在系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)中單獨(dú)成支。(2)采用全基因組鳥(niǎo)槍法(wholegenomeshotgun，wgs)策略，通過(guò)構(gòu)建約350bp大小的文庫(kù)，利用第二代測(cè)序技術(shù)(next-generationsequencing，ngs)-illuminahiseq測(cè)序平臺(tái)的pe150測(cè)序方法對(duì)所述菌株進(jìn)行基因組測(cè)序。對(duì)所獲菌株的下機(jī)原始序列中低質(zhì)量或污染序列進(jìn)行修剪及過(guò)濾，使用軟件hga2和quast進(jìn)行序列組裝。利用http://ggdc.dsmz.de提供的genome-to-genomedistancecalculator計(jì)算菌株cy25r-8與上述16srrna基因序列上親緣關(guān)系最近菌株的dna-dna分子雜交(digitaldna-dnahybridization，dddh)值(包括置信區(qū)間c.i.)，以及通過(guò)orthoani工具計(jì)算菌株之間的平均核苷酸同源性(averagenucleotideidentity，ani)值，結(jié)果如表2所示。表2菌株cy25r-8與模式菌株的基因組特征比較示意表菌株cy25r-8與參考菌株的dddh值在29％左右，ani值在84～86％，這些數(shù)值低于建議和普遍接受的物種界線，即dddh為70％，ani為95％～96％。因此可以證明菌株cy25r-8代表variovorax屬的一個(gè)新種。所述菌株已于2019年8月19日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(cgmcc)，分類命名為：貪噬菌(variovoraxsp.)保藏編號(hào)為：cgmccno.1.16908，保藏單位地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101。2、菌株cy25r-8的生理生化特征鑒定(1)對(duì)該菌株進(jìn)行一系列特征鑒定：參照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》第八版及《常見(jiàn)細(xì)菌鑒定手冊(cè)》中實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行鑒定；其中，碳源利用情況采用biolog全自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)，底物代謝采用api20ne試劑條鑒定,脂肪酸成分測(cè)定用gc-ms分析。具體結(jié)果如表3、4所示。表中“+”表示呈陽(yáng)性，“-”表示呈陰性。表3api20ne和常規(guī)鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果表生理生化特征檢測(cè)結(jié)果革蘭氏-氧化酶+過(guò)氧化氫酶+吲哚-凝膠-水解淀粉-硝酸鹽還原+h2s產(chǎn)生-v-p-m.r+脲酶+蔗糖發(fā)酵+，產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣葡萄糖發(fā)酵+，產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣甘露糖發(fā)酵+，產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣d-麥芽糖發(fā)酵+，產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣表4碳源利用情況表(biolog實(shí)驗(yàn)結(jié)果)底物結(jié)果底物結(jié)果糊精+d-葡糖醛酸+d-麥芽糖-葡糖醛酰胺+d-海藻糖-粘酸+蔗糖-奎寧酸+d-蘋(píng)果酸+丙酮酸甲酯+蜜三糖-l-乳酸+α-d-乳糖-檸檬酸+d-蜜二糖-α-酮-戊二酸+l-蘋(píng)果酸+吐溫40+d-半乳糖+1％乳酸鈉+3-甲酰葡糖+乙酸-d-果糖+甲酸-d-甘露醇+d-阿拉伯糖+甘油+d-葡糖-6-磷酸+d-果糖-6-磷酸+醋竹桃霉素+d-天冬氨酸+利福霉素sv+l-丙氨酸+硫酸四葵納-l-焦谷氨酸+萬(wàn)古霉素+l-天冬氨酸+四唑紫+l-谷氨酸+四唑藍(lán)+d-半乳糖醛酸+亞碲酸鉀-d-葡糖酸+氨曲南+l-半乳糖醛酸內(nèi)酯-溴酸鈉-3、通過(guò)培養(yǎng)和外觀觀察發(fā)現(xiàn)：在tsa培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)2d后，培養(yǎng)基上的菌落中間凸起，不透明，邊緣規(guī)則，表面光滑，呈淡黃色狀態(tài)。該菌株為革蘭氏陰性菌，在顯微鏡下個(gè)體形態(tài)呈短桿狀，無(wú)鞭毛，無(wú)芽孢生成。其菌落和個(gè)體形態(tài)分別如圖1和圖2所示。4、生長(zhǎng)條件優(yōu)選在不同溫度、ph、鹽度中分別進(jìn)行培養(yǎng)，生長(zhǎng)情況如表5所示。其中，“-”表示不生長(zhǎng)；“+”表示生長(zhǎng)；“++”表示生長(zhǎng)良好；“+++”表示生長(zhǎng)優(yōu)。表5不同情況下菌株cy25r-8的生長(zhǎng)情況從表5可知，cy25r-8菌株在10～37℃的溫度范圍內(nèi)均可以生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度范圍為25～37℃；在ph為3～10的范圍內(nèi)均可以生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)ph為6～8；菌株可生長(zhǎng)的鹽度為0～5％，最適為0～2％。cy25r-8菌株可在常見(jiàn)的tsa培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)。利用常規(guī)固體斜面培養(yǎng)、低溫保藏的方法，每次傳代可保藏3個(gè)月以上；以干燥冷凍法制作的長(zhǎng)期保藏菌種，可保藏1年以上，以20％甘油管在-80℃條件下，可進(jìn)行長(zhǎng)期保藏。實(shí)施例三：cy25r-8菌株應(yīng)用性能展示1、降解纖維素實(shí)驗(yàn)。使用cmc固體培養(yǎng)基擴(kuò)繁cy25r-8菌株(30℃培養(yǎng)3天)，隨后用2mg/ml的剛果紅溶液對(duì)cmc固體培養(yǎng)基進(jìn)行染色，然后用蒸餾水和1m的nacl各清洗一次，照相。結(jié)果如圖4所示，在cmc固體培養(yǎng)基上，cy25r-8菌株的周圍產(chǎn)生了透明圈。證明cy25r-8菌株具有降解纖維素的能力，可廣泛應(yīng)用于纖維素降解領(lǐng)域。2、降解幾丁質(zhì)實(shí)驗(yàn)。(1)繪制n-乙酰d-氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。配制1mmol/ml的n-乙酰-d-氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，分別稀釋成0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6μmol/μl的不同濃度的n-乙酰-d-氨基葡萄糖溶液。準(zhǔn)確移取1ml于37℃下反應(yīng)60min，隨后加入500uldns，煮沸顯色5min。再用冷水冷卻至室溫。然后稀釋5倍，用單蒸水作為空白對(duì)照在540nm下測(cè)定吸光值，繪制n-乙酰-d-氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果如圖5所示。(2)將菌株在tsb培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，隨后按體積比為1:100，將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接至幾丁酶誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，促進(jìn)菌株成長(zhǎng)。培養(yǎng)24h后，在4℃、10000r/min下離心10min，取上清液。(3)取上清液200μl于1.5mlep管中，加入濃度為1％的幾丁質(zhì)200μl、檸檬酸緩沖液300μl。其中，所述幾丁質(zhì)為：使用膠體幾丁質(zhì)和粉末幾丁質(zhì)分別進(jìn)行測(cè)試。加料結(jié)束并充分混勻后，在30℃下水浴反應(yīng)1h。然后加入500μldns溶液，煮沸5min，隨后快速冷卻至室溫，離心，取上清液，測(cè)od540。每組設(shè)三個(gè)重復(fù)，取平均值。根據(jù)n－乙酰－d－氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算酶活。(4)酶活定義為：在30℃反應(yīng)條件下，每小時(shí)分鐘釋放1μmol還原糖所需要的酶量為1個(gè)酶活力單位(u/ml)。菌株對(duì)膠體幾丁質(zhì)的酶活為0.45u/ml，對(duì)幾丁質(zhì)粉末的酶活為0.40u/ml。本發(fā)明提供了一株具有幾丁質(zhì)降解作用的貪噬菌。3、抗生素敏感測(cè)試參照：mataja,martínez-canovasj,quesadae,bejarv.adetailedphenotypiccharacterisationofthetypestrainsofhalomonasspecies.systapplmicrobiol2002；25:360–375，進(jìn)行抗生素敏感測(cè)試。具體為：將cy25r-8菌株涂布于tsa培養(yǎng)基平板上，同時(shí)用無(wú)菌的鑷子夾取不同種類的抗生素濾紙片放于平板。置于28℃培養(yǎng)2天后進(jìn)行觀察，若濾紙片周圍出現(xiàn)抑菌圈，則表明實(shí)驗(yàn)菌株對(duì)相應(yīng)的抗生素敏感、不耐藥；反之，若不出現(xiàn)抑菌圈，即為不敏感、耐藥。結(jié)果如表6所示。其中，“+”表示有抑菌圈，“-”表示無(wú)抑菌圈，“+/-w”表示有抑菌圈，但是不明顯。表6抗生素敏感試驗(yàn)結(jié)果抗生素結(jié)果抗生素結(jié)果抗生素結(jié)果頭孢西丁+氯霉素+氨芐西林-丁胺卡那+四環(huán)素-呋喃妥因-萘啶酸+慶大霉素+新生霉素+妥布霉素+卡那霉素-磷霉素+/-w頭孢噻污+鏈霉素-萬(wàn)古霉素-頭孢挫林+頭孢哌酮+紅霉素+/-w多粘菌素+頭孢他啶-林肯霉素-克林霉素-阿莫西林-利福平+環(huán)丙沙星+青霉素-氧氟沙星+4、溶磷作用(1)菌株的活化：取保存的cy25r-8菌種甘油管10μl涂布于tsa平板上，于28℃下培養(yǎng)2d進(jìn)行活化。隨后挑取單菌落接種于tsb液體培養(yǎng)基中，于28℃下培養(yǎng)2天。獲得cy25r-8菌株的菌體懸浮液。(2)溶無(wú)機(jī)磷的測(cè)定及測(cè)量：在250ml三角瓶中分別加入50ml無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基。接種1mlcy25r-8菌株的菌體懸浮液，以滅活菌作為空白對(duì)照，在30℃、200r/min下分別振蕩培養(yǎng)5d。取樣品，將樣品在10000r/min下離心10min，取上清液用鉬藍(lán)比色法測(cè)定有效磷含量，重復(fù)三次。結(jié)果顯示：cy25r-8菌株對(duì)磷酸三鈣的平均轉(zhuǎn)化量達(dá)113.55±8.9mg/l,遠(yuǎn)高于普通貪噬菌。cy25r-8菌株對(duì)磷酸三鈣的高轉(zhuǎn)化能力證明其具有植物促生、土壤土質(zhì)改善的巨大潛力。5、抑制植物病原真菌的作用采用對(duì)峙培養(yǎng)法測(cè)定菌株對(duì)番茄早疫病菌(alternariasolani)進(jìn)行抑制試驗(yàn)。具體操作如下：(1)菌株的活化：取保存的cy25r-8菌種甘油管10μl涂布于tsa平板上，于28℃下培養(yǎng)2d，然后挑取單菌落接種于tsb液體培養(yǎng)基里，于28℃下培養(yǎng)2天，獲得活化的cy25r-8菌株。同時(shí)用接種環(huán)挑取番茄早疫病菌的菌絲劃線于pda培養(yǎng)基上，于37℃下培養(yǎng)5～7d，獲得病原真菌菌落。(2)挑取步驟(1)中得到的病原真菌菌落，利用圓形打孔器取帶有病原真菌的菌餅接種于pda培養(yǎng)基正中央，然后在距真菌1～2cm位置的四周各接種上cy25r-8菌株(圖6中8號(hào)菌株)，及大腸桿菌dh5α(圖6中6號(hào)菌株)。37℃培養(yǎng)一周。(3)結(jié)果如圖6所示。cy25r-8周圍產(chǎn)生透明圈，并減少了番茄早疫病菌菌絲的成長(zhǎng)；證明其對(duì)番茄早疫病菌有明顯的拮抗作用。實(shí)施例四：cy25r-8菌株的代謝產(chǎn)物分析及作用分析1、將cy25r-8從甘油管中轉(zhuǎn)出，活化與復(fù)壯。按1：100的比例接種到tsb培養(yǎng)基準(zhǔn)備發(fā)酵種子液，再將種子液按1：10轉(zhuǎn)接至含有1000ml的1/2r2b培養(yǎng)基(購(gòu)自青島海博)的2000ml三角瓶中，在180rpm、28℃環(huán)境下?lián)u瓶發(fā)酵培養(yǎng)10d。將發(fā)酵液離心，取上清液,將得到的發(fā)酵液加入15％的amberlitetmxad16，180rpm、2h。隨后用水、50％甲醇/水、甲醇依次洗脫，再真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到31.11g粗提物。將粗提物過(guò)c18反相柱色譜，用10％～100％體積比的甲醇/水依次洗脫、分離、提純，得到18種化合物。2、分析、驗(yàn)證各化合物，具體方法包括：旋光由perkin-elmer341旋光儀測(cè)定；一維、二維核磁共振譜圖用brukeravance600和ascend400核磁共振儀在20℃恒溫測(cè)定，以tms為內(nèi)標(biāo)；低分辨質(zhì)譜(ms)用watersxevotq質(zhì)譜儀測(cè)定；高分辨質(zhì)譜(hr-esi-ms)用brukermicrotofqii質(zhì)譜儀質(zhì)譜儀測(cè)定；薄層層析硅膠gf254和柱層析硅膠(100～200，200-300目)均購(gòu)于青島海洋化工廠；制備型hplc采用北京創(chuàng)新通恒科技有限公司的lc3000液相色譜儀，配有uv/vis檢測(cè)器和ymc公司的c18高效液相色譜柱(20×250mm；10μm)；半制備型hplc采用agilenttecnologies1260infinity和perkin-elmer200液相色譜儀，配有uv/vis檢測(cè)器和phenomenex公司的c18高效液相色譜柱(10×250mm,5μm)；分析型hplc采用agilenttecnologies1260infinity液相色譜儀，配備有uv/vis檢測(cè)器和agilent公司c18高效液相色譜柱(4.6×1250mm,5μm)；hplc的檢測(cè)波長(zhǎng)均采用208nm；液相色譜使用的水為超純水，其它所用溶劑均為分析純，在使用前均經(jīng)過(guò)重蒸處理。