PCR電泳之瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)-瓊脂糖核酸電泳步驟
2022-05-06 13:21:41
[導(dǎo)讀]聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）是體外合成雙鏈DNA的一種方法，其原理類(lèi)似于天然DNA的復(fù)制過(guò)程，其特異性主要依賴(lài)于與其目的片段兩端互補(bǔ)的特異引物和高特異性的酶。典型的PCR反應(yīng)有三個(gè)步驟：變性，退火，延伸，經(jīng)過(guò)多次循環(huán)反應(yīng)，獲得目的片段。
- 將電泳所用器具蒸餾水洗凈，架好梳子
- 根據(jù)要分離的DNA片段大小制備合適濃度的瓊脂糖凝膠，準(zhǔn)確稱(chēng)取一定的瓊脂糖加入到錐形瓶中，加入30ml左右的電泳緩沖液（TAE或TBE）
- 在微波爐中加熱融化后冷卻至40℃左右，充分混勻后倒入電泳槽中
- 室溫下凝固40分鐘左右，小心拔出梳子，將凝膠放置電泳槽中準(zhǔn)備點(diǎn)樣
- 在電泳槽中加入電泳緩沖液，漫過(guò)凝膠表面即可，點(diǎn)樣孔內(nèi)不要有氣泡
- 樣品點(diǎn)樣前準(zhǔn)備好，（在八連管中）加入5ul樣品，1ul的6xLoding buffer和1ul的染料混合，用搶將混合后的樣品緩緩注入到點(diǎn)樣孔中，注意不要串孔
- 按照正負(fù)極（紅正黑負(fù)），接通電源，電壓40-60V，時(shí)間30-40min，可根據(jù)溴酚藍(lán)的位置判斷是否終止電泳
- 電泳結(jié)束，關(guān)閉電源，凝膠成像觀察，并對(duì)比marker確定片段大小
