最大吸收波長的測定和選擇

由圖1 可知，胡桃醌的最大吸收波長出現(xiàn)在250 nm 左右，此時受干擾較少。因此選擇250 nm 為測定波長。

2． 2 流動相組成的影響試驗

從圖2 可以看出，隨著水的比例增加，流動相的極性增大，保留時間也延長。當甲醇的體積分數(shù)小于50% 時，分析時間過長，峰形開始逐漸變差。綜合以上情況，選用甲醇的體積分數(shù)為50%( 即甲醇與水體積比為1 ∶ 1) 。

2． 3 pH 值的影響試驗

流動相中水相的pH 值在2 ～ 7 范圍對胡桃醌的保留時間( 圖3) 和峰面積都沒有太大的影響，但當pH 值為4 時，峰型較好，因此本試驗中選取水相的pH 值為4。

2． 4 柱溫的選擇試驗

試驗結果( 圖4) 表明: 隨著溫度升高，各物質之間的分離效果有所提高，當溫度高于30 ℃，分離效果隨著溫度升高變化不再明顯，考慮到色譜柱使用溫度條件，選擇柱溫30 ℃。

2． 5 標準曲線的建立

以質量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標作工作曲線，得到圖5，對曲線進行線性擬合，得到胡桃醌含量的標準曲線方程為y = 598 860x － 49 983 ( r2 = 0． 999 1 ) ，表明胡桃醌在10 ～ 150 μg /mL 范圍內線性關系良好。

2． 6 精密度試驗

由表1 可知，高、中、低3 個不同水平的標準品溶液ＲSD值均小于2%，表明儀器及進樣的精密度良好。表1 精密度試驗結果樣品濃度( μg /mL)

測定濃度( μg /mL)1 2 3 4 5 平均ＲSD( %)

10 9． 73 9． 82 9． 79 10． 21 9． 87 9． 88 1． 29

50 49． 81 50． 33 49． 83 48． 97 49． 82 49． 75 0． 63

100 99． 82 98． 76 100． 09 99． 33 98． 67 99． 33 0． 49

2． 7 穩(wěn)定性試驗

由表2 可知，所測得濃度的ＲSD 為2． 5%，表明該方法在10 h 之內穩(wěn)定性較好，即樣品溶液可以在10 h 之內測定，基本上可以滿足試驗要求。