奧豪斯儀器（上海）有限公司在本文中利用奧豪斯PH計STARTER 3100/F對菌株的最適生長ｐＨ環(huán)境進行了測定。

   １奧豪斯儀器分析菌株的篩選及形態(tài)學特征

   經(jīng)過初篩和復篩從污泥土樣中篩選出了２株能以萘為唯一碳源進行生長的菌株,分 別 命 名 為ＸＡ１和ＸＢ１ 這２株菌在ＬＢ固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)初期均為乳白色菌落,在培養(yǎng)３ｄ之后ＸＡ１和ＸＢ１的菌落顏色均轉(zhuǎn)變成淡黃色,且ＸＡ１的 菌 落 直 徑 為２．５３．０ｍｍ,而ＸＢ１在相同的培養(yǎng)時間里菌落直徑只有１２ｍｍ,２株菌的菌落特征均為圓形較透明,邊緣整齊,表面隆起濕潤光滑,易挑起 .在１００倍油鏡下觀察均為長桿狀革蘭氏染色結(jié)果均為陰性.

   ２奧豪斯儀器上海有限公司對菌株系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建及菌種鑒定:將ＸＡ１ＸＢ１的１６ＳｒＤＮＡ序列通過Ｂｌａｓｔ在ＮＣＢＩ上進行相似序列比對結(jié)果發(fā)現(xiàn),,ＸＡ１和ＸＢ１與Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．多個菌株的序列相似性均達到９９％ .對菌株的形態(tài)觀察及１６ＳｒＤＮＡ序列比對結(jié)果:可 以 確 定ＸＡ１和ＸＢ１皆屬于熒光假單胞菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ.

   ３菌株的生理生化特性

   3.1菌株生長曲線的測定ＸＡ１和ＸＢ１在ＬＢ培養(yǎng)基中９６ｈ的生長狀況,ＸＡ１在培養(yǎng)的前３６ｈ為對數(shù)生長期３６ ６０ｈ,為穩(wěn)定生長期６０ｈ,以后進入衰亡期ＸＢ１在培養(yǎng)的前３２ｈ,為對數(shù)生長期３２ ８４ｈ,為穩(wěn)定生長期８４ｈ之后,進入衰亡期.

   3.2菌株最適生長溫度的測定: 對ＸＡ１和ＸＢ１在以萘５００ ｍｇＬ為 唯 一 碳 源 的 無 機 鹽 培 養(yǎng) 基,PH7.0(利用奧豪斯儀器（上海）有限公司生產(chǎn)的STARTER 3100/F型PH計測定）中于２８３７℃下的生長狀況進行觀測，結(jié)果顯示２株菌的最適生長溫度均為２８℃， 在３７℃下不能生長。

   3·3 奧豪斯儀器（上海）有限公司利用奧豪斯PH計STARTER 3100/F對菌株最適生長ｐＨ的測定： 對ＸＡ１和ＸＢ１在不同ｐＨ值６．５、７．０、７．５、８．０、８．５以 萘５００ｍｇ/Ｌ為唯一碳源的無機鹽ＭＭ培養(yǎng)基中，于２８℃１８０ｒｍｉｎ振蕩培養(yǎng)，４ｄ的生長狀況進行測定，結(jié)果顯示ＸＡ１的最適生長ｐＨ為７．５，ＸＢ１的最適生長ｐＨ為７．０。

   3·4 菌株降解譜的測定 ：分 別 以 萘菲聯(lián) 苯芴熒蒽苯并芘為唯一碳源測定菌株ＸＡ１ＸＢ１和模式菌株ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａＫＴ２４４０于ｐＨ７．２（利用奧豪斯STARTER 3100/F酸度計測量），１８０ｒｍｉｎ下培養(yǎng)１０ｄ的生長狀況。結(jié)果顯示ＸＡ１能以萘菲芴熒蒽為唯一碳源代謝ＸＢ１能以萘菲熒蒽及苯并芘為唯一碳源進行代謝ＸＡ１ＸＢ１的降解譜明顯比Ｐ．ｐｕｔｉｄａＫＴ２４４０５菌株ＸＡ１ＸＢ１，對萘的降解特性， 將處于對數(shù)生長期的菌株按３％的接種量，接入萘質(zhì)量濃度為５００ｍｇ/Ｌ的無機鹽液體培養(yǎng)基中２８℃，１８０ｒｍｉｎ下恒溫振蕩培養(yǎng)，可知培養(yǎng)３ｄ后菌株ＸＡ１對萘的降解率達到９３．４％ ＸＢ１對萘的降解率達到７４．７％，菌株ＸＡ１ＸＢ１對萘的降解效果Ｆｉ ｇ．６ＴｈｅｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｆｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅｂｙＸＡ１ａｎｄ，ＸＢ１６菌株ＸＡ１ＸＢ１降解途徑的研究， 將培養(yǎng)到對數(shù)期的ＸＡ１和ＸＢ１分別接種到５０ｍＬ以水楊酸ＳＡ０．２ｇＬ和鄰苯二甲酸ＯＡ０．２ｇＬ為唯一碳源的無機鹽ＭＭ培養(yǎng)基中２８℃１８０ｒｍｉｎ恒溫振蕩培養(yǎng)結(jié)果，表明ＸＡ１和ＸＢ１皆存在水楊酸和鄰苯二甲酸２種代謝途徑且ＸＡ１和ＸＢ１都以水楊酸代謝途徑為主。

   4 部分關(guān)鍵酶基因的ＰＣＲ擴增與鑒定： 選取水楊酸代謝 途 徑 的 部 分 關(guān) 鍵 酶 基 因萘 雙 加 氧 酶ｎａｈＡＣ 水 楊 醛 脫 氫 酶ｎａｈＦ 水 楊 酸 羥 化 酶ｎａｈＧ和兒茶酚２３－雙加氧酶ｎａｈＨ 進行ＰＣＲ擴增通過Ｂｌａｓｔ比對結(jié)果，表明ＸＡ１具有ｎａｈＡＣｎａｈＦｎａｈＨ三個基因與文獻已報道的基因相似度均達到９９％ ＸＢ１具有ｎａｈＡＣ和ｎａｈＨ兩 個 基 因與文獻已報道的基因相似度也達到９９％，

可以初步確定ＸＡ１和ＸＢ１是以水楊酸途徑對萘進行降解的但２株菌中都沒有基因ｎａｈＧ存在證明其還是有別于已知的降解途徑。