農(nóng)藥濃度與抑制率關(guān)系

在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸醋類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物（乙酰膽堿）水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在４１２ｎｍ處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率。

應(yīng)用速測(cè)儀分別測(cè)定５種不同濃度農(nóng)藥溶液對(duì)酶的抑制率，得出在加熱與常溫情況下檢測(cè)濃度與抑制率之間的關(guān)系（見(jiàn)表１）。結(jié)果表明：１２種農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制率與農(nóng)藥濃度之間呈負(fù)相關(guān)，隨著濃度的下降，酶抑制率也降低。不同農(nóng)藥之間對(duì)酶的抑制率存在一定的差異。在酶促反應(yīng)過(guò)程，保持３７℃恒溫對(duì)酶促反應(yīng)具有重要作用，與室溫下比較（實(shí)驗(yàn)時(shí)溫度為２５～３０℃），大部分農(nóng)藥對(duì)酶的抑制率比室溫時(shí)提高，在農(nóng)藥濃度高時(shí)兩者差異不是很明顯，當(dāng)農(nóng)藥濃度很低時(shí)，加熱時(shí)（３７℃）酶抑制率比不加熱時(shí)差異較明顯。但也有個(gè)別農(nóng)藥例外，如馬拉硫磷在加熱情況酶抑制率反而偏低一些。

農(nóng)藥檢測(cè)限

當(dāng)蔬菜樣品中提取液對(duì)酶的抑制率≥５０％時(shí)，即為陽(yáng)性反應(yīng)，表示蔬菜中含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥。由檢測(cè)結(jié)果可知，各種農(nóng)藥顯陽(yáng)性反應(yīng)的加標(biāo)溶液濃度區(qū)間（見(jiàn)表２，表３），在所檢測(cè)的１２種農(nóng)藥中，除了敵敵畏、對(duì)硫磷、敵百蟲(chóng)、三唑磷４種農(nóng)藥對(duì)溫度比較敏感，其它８種農(nóng)藥對(duì)溫度不敏感。

實(shí)際檢測(cè)效果

將芹菜、豆角、辣椒、小白菜和空心菜５種蔬菜品種經(jīng)過(guò)前處理提取后，進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測(cè)。從表４中可以看出，５種蔬菜提取液對(duì)酶的抑制率均小于５０％，說(shuō)明農(nóng)藥殘留沒(méi)有超標(biāo)。

試驗(yàn)方法的改進(jìn)

試驗(yàn)使用檢測(cè)試劑盒為東莞綠健，所以試劑的配制都是按照東莞綠健的提供方法配制的。國(guó)標(biāo)與綠健的方法中酶、顯色劑和底物都是各加１００μＬ，但在實(shí)驗(yàn)中酶加７５μＬ，顯色劑和底物各加５０μＬ。在加完酶和顯色劑之后需搖勻放置，國(guó)標(biāo)要求放置１５ｍｉｎ，綠健要求放置１０ｍｉｎ，在該試驗(yàn)中放置１０ｍｉｎ，與綠健的一致。國(guó)標(biāo)的方法是在反應(yīng)３７℃中進(jìn)行，而綠健要求在室溫中放置，考慮到實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性及實(shí)用性，同時(shí)做了２組實(shí)驗(yàn)（加熱和溫室）。結(jié)果表明，兩者對(duì)酶抑制率差異不是很明顯，這可能與惠州常年室溫溫度較高（年均氣溫在２２℃）有關(guān)。在實(shí)際檢測(cè)時(shí)可能要考慮溫度因素，在冬天溫度較低時(shí)需要使用空調(diào)等取暖設(shè)備使室溫保持在２０℃左右，保持反應(yīng)能正常進(jìn)行。在預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，反應(yīng)時(shí)將酶、底物、顯色劑各加入１００μＬ時(shí)，會(huì)導(dǎo)致酶與底物反應(yīng)過(guò)快，在３ｍｉｎ之內(nèi)就會(huì)超過(guò)檢測(cè)范圍。后來(lái)對(duì)酶、底物和顯色劑的用量進(jìn)行優(yōu)化，酶加７５μＬ，底物，顯色劑各加５０μＬ，這種組合的效果是比較好的。

３．２　檢測(cè)方法的可靠性

試驗(yàn)應(yīng)用ＰＲ－２０２－５農(nóng)藥殘毒速測(cè)儀對(duì)１２種農(nóng)藥進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)以紫外可見(jiàn)ＵＶ－７５０４分光光度計(jì)為對(duì)照，結(jié)果表明農(nóng)藥殘毒速測(cè)儀與分光光度計(jì)的檢測(cè)數(shù)據(jù)差異不超過(guò)１０％（數(shù)據(jù)未列出），應(yīng)用速測(cè)儀檢測(cè)效果較分光光計(jì)好。說(shuō)明ＰＲ－２０２－５農(nóng)藥殘毒速測(cè)儀適用于基層檢測(cè)站快速檢測(cè)。另外，檢測(cè)中有１１種農(nóng)藥檢出限低于國(guó)標(biāo)的檢測(cè)限，只有丁硫克百威比國(guó)標(biāo)稍高，可能與使用的試劑盒有關(guān)。