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動(dòng)物水解蛋白的測(cè)定

2016-07-18 08:09:45
[導(dǎo)讀]生鮮乳中動(dòng)物水解蛋白的測(cè)定方法:用鹽酸水解牛奶中的蛋白質(zhì),過(guò)濾后定容;取部分試樣,于氮吹儀上吹干,再加入稀鹽酸溶解、定容;注入氨基酸分析儀進(jìn)行分離,外標(biāo)法定量。如果樣品中檢測(cè)出L-羥脯氨酸,則認(rèn)為牛奶中摻入動(dòng)物水解蛋白。

L-羥脯氨酸是人體非必需氨基e酸,是膠原蛋白(動(dòng)物水解蛋白)特有的氨基酸,占正常膠原蛋白氨基酸總量的10%以上,是衡量機(jī)體膠原含量的一個(gè)重要指標(biāo),牛奶中不含此氨基酸。

動(dòng)物水解蛋白是一種廉價(jià)的工業(yè)原料,最常見(jiàn)的就是皮革粉。將其摻入牛奶或奶粉中可提高蛋白質(zhì)的含量。如果人食用摻入動(dòng)物水解蛋白的產(chǎn)品,則會(huì)導(dǎo)致消化不良,吸收利用率降低,從而影響人體健康。

1 測(cè)定原理

試樣經(jīng)酸水解后,過(guò)濾,用稀鹽酸溶解,注入氨基酸分析儀進(jìn)行測(cè)定。采用外標(biāo)法定量。

2 試劑與材料

除非另有規(guī)定,應(yīng)選用優(yōu)級(jí)純?cè)噭┖头螱B/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。

鹽酸7.8mol/L,將650mL優(yōu)級(jí)純的濃鹽酸小心倒入350mL超純水中,混勻。

配制茚三酮顯色液,方法如表1所示。

配制苯酚水溶液(5.0%,w/v):稱取苯酚5.0g,溶于100mL水中。

配制鹽酸溶液(0.1 mol/L):量取鹽酸(7.8mol/L)16.6mL,倒入1000mL水中。

L-羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)品,純度≥99%。

配制L-羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:稱取100mg(精確到0.1mg)羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)品,用鹽酸溶液(0.1mol/L)溶解并定容至100mL容量瓶中。該溶液的濃度為1000mg/L,于4℃冰箱內(nèi)貯存,有效期3個(gè)月。2.8 準(zhǔn)備苯酚溶液。

L-羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)工作液:準(zhǔn)確吸取L-羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.00mL于100mL的容量瓶?jī)?nèi),用鹽酸溶液(0.1mol/L)定容。該溶液的濃度為。10.00mg/L,于4℃冰箱內(nèi)貯存,有效期1周。

儀器與設(shè)備

L-8900氨基酸自動(dòng)分析儀、電熱恒溫干燥箱、配有聚四氟乙烯密封蓋的水解管、電子天平(精確到0.0001g)、定量濾紙、0.45μm水性樣品過(guò)濾器(直徑13mm)、氮吹儀。


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