摘要: 為研制用于檢測農(nóng)產(chǎn)品中鹽酸克倫特羅殘留的免疫傳感器的分子識別元件 感受器, 用二醋酸纖維素作為載體支架結(jié)構(gòu), 戊二醛作為交聯(lián)劑, 己二胺作為制孔劑, 對制備載體膜的最佳方案進行了篩選, 制備出了符合標準的載體膜。而后用效價為1400 的抗鹽酸克倫特羅抗體包被膜與酶標抗原偶聯(lián), 在測定體系中檢測過氧化氫的減少量, 以衡量感受器部件的靈敏度, 并用標準品測定其最低檢測限, 同時設(shè)質(zhì)控膜。結(jié)果表明, 質(zhì)控膜和測定膜的電流變化值差異顯著( P <0. 05) , 感受器部件反應靈敏, 最低檢測限達0. 3 g/ L。

關(guān)鍵詞: 免疫傳感器; 鹽酸克倫特羅; 載體膜; 感受器部件

目前, 農(nóng)產(chǎn)品及食品中農(nóng)藥、獸藥、有害添加劑等物質(zhì)的殘留非常嚴重, 是世界性的食品安全控制的難題。因此, 研制和開發(fā)高效、實用的檢測技術(shù)和手段是控制有害物殘留的關(guān)鍵。生物傳感器技術(shù)與常規(guī)的化學分析、儀器分析方法相比, 具有敏感性、準確性和特異性高, 易操作, 價格便宜, 方便省時, 精度高, 便于利用計算機收集和處理數(shù)據(jù)以及不會或很少損傷樣品和造成污染, 易于批量生產(chǎn)等優(yōu)點, 是一種新型的檢測技術(shù)[ 1] 。1962 年, Clark 和Lyons最先提出了生物傳感器的設(shè)想。20 世紀60 年代中期, 最早的生物傳感器?? ?? ?? 葡萄糖傳感器問世, 70年代生物傳感器的研究有了較大的發(fā)展[ 2, 3] 。80 年代以來, 由于新原理、新技術(shù)的不斷應用, 生物傳感器技術(shù)蓬勃發(fā)展, 取得了長足的進步。國外目前研

收稿日期: 2004- 02- 23基金項目: 上海市農(nóng)委科技興農(nóng)重點攻關(guān)項目( 農(nóng)攻字第2002- 20052)

制成功的傳感器已有許多, 例如葡萄糖傳感器、青霉素傳感器、谷氨酰胺傳感器、谷氨酸傳感器、檢測阿特拉津的固相傳感器等。我國生物傳感器的研究進展也很快。目前, 已研制出濕度傳感器、測定土壤水分的傳感器、測定水中BOD 的傳感器、測定香蕉中草酸含量的組織傳感器等[ 4] 。為有效控制有害物殘留、保障食品安全, 本試驗研究了檢測鹽酸克倫特羅殘留的免疫生物傳感器的組成部件, 即最關(guān)鍵的感受器部件的制備方法、最佳檢測條件, 并對制備的感受器部件的性能進行測試和檢驗, 以為整個傳感器的后續(xù)研究工作奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1. 1 試驗設(shè)計

免疫傳感器設(shè)計原理: 將生物技術(shù)與微電子技術(shù)相結(jié)合, 利用抗原、抗體專一性結(jié)合而導致電化學變化的原理, 將激素、抗生素等的單克隆抗體微型化膜( 感受器部件或分子識別物) 固定于換能器( 如氧電極等元件) 表面, 測定時在待測的激素、抗生素溶液中加入已知濃度且經(jīng)酶標記的激素、抗生素, 待測抗原與標記抗原競爭性地結(jié)合電極上的抗體, 使經(jīng)洗滌后的氧電極與過氧化氫溶液接觸, 標記酶催化過氧化氫產(chǎn)生氧氣, 從而連接電信號輸出、顯示和數(shù)據(jù)處理、轉(zhuǎn)化的電子元件系統(tǒng), 直接顯示測得殘留物的含量或濃度值。

設(shè)計方案: 研究傳感器最關(guān)鍵的部分感受器部件的制備和檢測核心技術(shù)。包括制備合適的載體膜、包被鹽酸克倫特羅抗體、封閉、偶聯(lián)酶標抗原、電流的測試等過程, 從而評價感受器部件的效果和性能。

1. 2 ?? 試劑及儀器

抗鹽酸克倫特羅的單克隆抗體、檢測抗體膜活性的ELISA 試劑盒、鹽酸克倫特羅系列標準物均購自德國r-Biopharm 公司; 過氧化氫酶為Sigma 公司

產(chǎn)品; 醋酸纖維素( CA) 、250 mL/ L 戊二醛、1, 6-己二胺( HDA) 、二氯甲烷、無水乙醇均為分析純, 購自中國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑公司; C1液的配制: 二氯甲烷200 mL + 無水乙醇50 mL ( V / V = 41) ;C2液的配制: 125 mL/ L 戊二醛20 mL + 無水乙醇10 mL。儀器: 玻璃模具為自行訂制; 加樣器為Eppendorf公司生產(chǎn); 65- LL2 IKA WOOK 型搖床、測試電極、JPBJ- 608 型溶解氧分析儀均為上海精密科學儀器有限公司生產(chǎn)。