本文簡要介紹了分光光度技術(shù)的原理、分光光度計的結(jié)構(gòu)及其主要的應(yīng)用。

1關(guān)鍵詞2 分光光度技術(shù); 原理; 應(yīng)用

每種物質(zhì)都具有其特異的吸收光譜, 不同物質(zhì)由于其分子結(jié)構(gòu)不同, 對不同波長線的吸收能力也不同。分光譜來鑒定物質(zhì)性質(zhì)及含量的技術(shù), 分光光度技術(shù)理論依據(jù)是指利用物質(zhì)特有的Lambert- Beer 定律。分光光度技術(shù)是光電比色技術(shù)的發(fā)展, 光電比色技術(shù)只限于在可見光區(qū), 分光光度技術(shù)則可以擴展到紫外光區(qū)和紅外光區(qū)。

1 分光光度技術(shù)的原理

111 光的基本知識

光是由光量子組成的, 具有二重性, 即不連續(xù)的微粒和連續(xù)的波動性。波長和頻率是光的波動性和特征, 可用下式表示:K=C/V

式中: K 為波長, V 為頻率, C 為光速等于299770km/ s。光屬于電磁波。自然界中存在各種不同波長的電磁波, 分光光度法所使用的光譜范圍在200~ 10, 000nm之間。其中200~ 400nm為紫外光區(qū), 400~ 760 nm 為可見光區(qū), 760~ 10, 000nm為紅外光區(qū)。

112 朗伯- 比爾( Lambert- Beer) 定律

朗伯- 比爾定律是比色分析的基本原理, 這個定律是有色溶液對單色光的吸收程度與溶液及液層厚度間的定量關(guān)系。此定律是由朗伯定律和比爾定律歸納而得。

( 1) 朗伯定律

一束單色光通過溶液后, 由于溶液吸收了一部分光能, 光的強度就要減弱: 若溶液濃度不變, 則溶液的厚度愈大( 即光在溶液中所經(jīng)過的途徑愈長) , 光的強度減低也愈顯著。

( 2) 朗伯- 比爾定律

如果同時考慮吸收層的厚度和溶液濃度對光吸收的影響, 則必然將朗伯定律和比爾定律合并起來, 吸光度與溶液的濃度和液層的厚度的乘積成正比, 這就是朗伯- 比爾定律。

113 分光光度計基本結(jié)構(gòu)

能從含有各種波長的混合光中將每一單色光分離出來并測量其強度的儀器稱為分光光度計。分光光度計因使用的波長范圍不同而分為紫外光區(qū)、可見光區(qū)、紅外光區(qū)以及萬用( 全波段) 分光光度計等。無論哪一類分光光度計都由下列五部分組成, 即光源、單色器、狹縫、樣品池, 檢測器系統(tǒng)。