緩釋劑的紅外光譜圖

將胰島素緩釋劑樣品進(jìn)行紅外光譜分析，得到紅外光譜如圖1 所示。由圖1 可以看到，緩釋劑的紅外圖譜中沒有3360cm － 1處NH2 的伸縮振動峰的存在，說明原藥胰島素在緩釋劑中分布較均勻，沒有明顯聚集區(qū)域的出現(xiàn)，緩釋劑的紅外圖譜與空白載體的紅外圖譜相似，但是吸收峰位置發(fā)生遷移，同時由胰島素的紅外圖譜與緩釋劑的紅外圖譜比較可知，緩釋劑中1225cm － 1和1075 cm － 1 峰增強(qiáng)。胰島素中1660 cm － 1 和

1551 cm － 1處的吸收峰在緩釋劑中遷移至1733 cm － 1和1645 cm － 1 處，2342 cm － 1 和1400 cm － 1 峰沒有變化。載體的圖譜與純胰島素的圖譜相比，未出現(xiàn)新的特征峰，推斷胰島素、殼聚糖、海藻酸鈉之間未發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。

通過多次實(shí)驗(yàn)，所得緩釋劑的紅外光譜基本相同，說明制備的胰島素緩釋劑穩(wěn)定，其中載體的伸縮振動特征峰與標(biāo)準(zhǔn)品的紅外特征吸收峰值一致，表明緩釋劑中可以分析出胰島素的成分，說明該復(fù)合載體中確實(shí)包裹胰島素。

2． 2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

為了選擇胰島素吸收波長，對胰島素標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行全波段掃描。胰島素在400 － 800nm 范圍內(nèi)有較強(qiáng)吸收峰，在620nm 波長處溶液有最大吸收。對于胰島素最大吸收波長的測定，首先是配制濃度為0． 025mg /mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別移取0． 0mL、0． 3mL、0． 6mL、0． 9mL、1． 2mL、1． 5mL、1． 8mL、2．1mL，再加入對應(yīng)的去離子水量為2． 1mL、1． 8mL、1．5mL、1． 2mL、0． 9mL、0． 6mL、0． 3mL、0． 0mL，每組溶液中加入配制好的考馬斯亮藍(lán)指示劑，充分搖勻，測定吸光度，得到不同濃度胰島素溶液吸光度曲線，如圖3 所示。

得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為A = 0． 35325 + 8． 95714C，Ｒ = 0． 99994式中A 為吸光度，C 為標(biāo)準(zhǔn)溶液中胰島素的質(zhì)量濃度( mg /mL) 。結(jié)果表明，胰島素質(zhì)量濃度在0～ 0． 06mg /mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2． 3 溶出度測定結(jié)果

樣品膠囊中胰島素( insuline) 簡寫為IN。取六組實(shí)驗(yàn)所得的載胰島素的殼聚糖－ 海藻酸鈉制劑，將它們制作成膠囊，于溶出度儀上，在人工胃液環(huán)境下進(jìn)行溶出度的實(shí)驗(yàn)測定，得到表1 中的數(shù)據(jù)。從表1 看出: 總體上，反應(yīng)時間對溶出液中胰島素的濃度的影響比較大，測試的六組樣品都是隨著反應(yīng)時間的增加，胰島素濃度下降; 但反應(yīng)時間在前4 個小時內(nèi)，胰島素濃度相對穩(wěn)定地維持在一定范圍內(nèi)，說明緩釋劑制劑在被模擬胃液消化時，緩慢釋放胰島素，這也證明了殼聚糖－ 海藻酸鈉載體具有良好的緩釋效果。當(dāng)溶出時間達(dá)到5h 時，胰島素濃度明顯下降，載體制劑較好的完成了溶出實(shí)驗(yàn)，胰島素被基本消化。從表1 還可以看出，在實(shí)驗(yàn)的6 個樣品中，3號樣品相對較好，制劑量較少，但是釋放胰島素的量相對較穩(wěn)定。

2． 4 緩釋劑制備工藝優(yōu)化

選取對溶出度有顯著影響的殼聚糖與海藻酸鈉的質(zhì)量配比、混合溶液( 擔(dān)載胰島素后) 反應(yīng)時間和加胰島素量三個主要因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)，結(jié)果說明溶出度比較恒定的條件分別是: 殼聚糖與海藻酸鈉的配比為1: 2，混合溶液反應(yīng)時間為30min，加胰島素量為濃度是1． 0mg /mL 的溶液28mL。在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，進(jìn)行正交試驗(yàn)，表頭設(shè)計見表2。根據(jù)表2 樣品膠囊中的胰島素溶出結(jié)果，以3號樣品緩釋劑在溶液中溶出4h 時溶液中胰島素濃度為考察指標(biāo)，以殼聚糖與海藻酸鈉的質(zhì)量配比( A) 、加胰島素量( B) 、混合溶液( 擔(dān)載胰島素后) 反應(yīng)時間( C) 作為考察因素，應(yīng)用L9( 34 ) 正交表安排實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。正交設(shè)計實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明: 各因素對緩釋劑在模擬人工胃液中溶出4h 時溶液中胰島素濃度的影響大小順序?yàn)? 殼聚糖與海藻酸鈉的質(zhì)量配比＞ 加胰島素量＞ 混合溶液( 擔(dān)載胰島素后) 反應(yīng)時間; 殼聚糖與海藻酸鈉的質(zhì)量配比和加胰島素量對緩釋劑的質(zhì)量影響顯著，混合溶液( 擔(dān)載胰島素后) 反應(yīng)時間的影響不顯著。緩釋劑的最佳制備條件為A2B2C2，即殼聚糖與海藻酸鈉的質(zhì)量配比為1: 2，加胰島素量為28mL，混合溶液( 擔(dān)載胰島素后) 反應(yīng)時間為30min。采用最佳工藝條件制備的緩釋劑在模擬人工胃液中溶出4h 時溶液中胰島素濃度為26． 6μg /mL。

3 結(jié)論

以殼聚糖和海藻酸鈉為基本的載體原料，制備了載胰島素的緩釋劑，并進(jìn)行了藥物緩釋性能研究。正交設(shè)計實(shí)驗(yàn)優(yōu)化的最佳制備工藝條件為: 殼聚糖與海藻酸鈉的質(zhì)量配比為1: 2，加胰島素量為28mL 濃度為1． 0mg /mL) ，混合溶液( 擔(dān)載胰島素后) 反應(yīng)時間為30min; 采用最佳工藝條件制備的緩釋劑在模擬人工胃液中溶出4h 時，溶液中胰島素濃度為26． 6μg /mL。本實(shí)驗(yàn)制備緩釋劑過程中，無有毒有害物質(zhì)加入和釋放，不污染環(huán)境，制備工藝簡單，操作安全，制得的緩釋劑具有顯著的緩釋作用。