Ｓｅｖａｇ法脫蛋白

２．１．１ 震蕩次數(shù)由圖１可知，隨著震蕩次數(shù)的增加，多糖損失率和蛋白去除率均呈上升趨勢(shì)，當(dāng)震蕩次數(shù)達(dá)到４～５次時(shí)，蛋白去除率相差不大，但震蕩次數(shù)為４次時(shí)的多糖損失率明顯低于５次時(shí)，所以選擇４次為最佳震蕩次數(shù)。

２．１．２ 震蕩時(shí)間隨著震蕩時(shí)間的增加，多糖損失率和蛋白去除率的含量呈上升的趨勢(shì)（圖１），當(dāng)震蕩時(shí)間為２０ｍｉｎ時(shí)，蛋白去除率已達(dá)到３８．９９％，再延長(zhǎng)震蕩時(shí)間蛋白去除率略有增加，但不明顯，而多糖損失率在震蕩時(shí)間為２０ｍｉｎ時(shí)相對(duì)較低，再延長(zhǎng)震蕩時(shí)間多糖損失率有所增加，所以選擇震蕩時(shí)間為２０ｍｉｎ。

２．１．３ 試劑用量隨著Ｓｅｖａｇ試劑用量的增加，多糖損失率和蛋白去除率均逐漸增大（圖１），當(dāng)試劑用量為多糖溶液體積的１／２時(shí)蛋白去除率已達(dá)到最大值（４３．１０％），所以選擇Ｓｅｖａｇ試劑用量為粗多糖溶液體積的１／２。

２．１．４ Ｓｅｖａｇ 法脫蛋白的工藝驗(yàn)證試驗(yàn)在Ｓｅｖａｇ試劑用量為粗多糖溶液體積的１／２，震蕩時(shí)間為２０ｍｉｎ，震蕩次數(shù)為４次的條件下對(duì)猴腿蹄蓋蕨多糖進(jìn)行脫蛋白試驗(yàn)，其蛋白去除率為６３．１５％，多糖損失率為１４．５３％。

２．２ ＴＣＡ法脫蛋白

　　由圖２可知，當(dāng)ＴＣＡ 在粗多糖溶液中的濃度逐漸升高時(shí)，多糖損失率和蛋白去除率也逐漸升高，當(dāng)ＴＣＡ在粗多糖溶液中的濃度達(dá)到３．０％時(shí)，蛋白去除率已達(dá)到較高值（４６．１３％），再提高ＴＣＡ的濃度，蛋白去除率增加趨勢(shì)平緩，且在該濃度下多糖損失率明顯低于ＴＣＡ濃度為３．５％、４．０％時(shí)，所以將ＴＣＡ濃度固定為３．０％。在該濃度下，當(dāng)震蕩次數(shù)達(dá)到３ 次時(shí)，蛋白去除率已達(dá)到較高水平，為

５６．２５％，再增加震蕩次數(shù)，去除率增加不明顯，而且導(dǎo)致多糖損失率提高。

２．３ 酶法脫蛋白

２．３．１ 木瓜蛋白酶加入量由圖３可知，隨著木瓜蛋白酶加入量的增加，多糖損失率和蛋白去除率逐漸升高，但增加趨勢(shì)平緩，木瓜蛋白酶的加入量對(duì)猴腿蹄蓋蕨多糖的脫蛋白效果影響不明顯，在木瓜蛋白酶加入量為０．０２ｇ時(shí)，多糖損失率和蛋白去除率分別為９．５１％和６２．０４％。故木瓜蛋白酶的加入量在０．０２ｇ左右較好。

２．３．２ 酶解溫度隨著酶解溫度的升高，多糖損失率和蛋白去除率均呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)，由圖３可知，酶解溫度為４０℃時(shí)，蛋白去除率和多糖損失率為６２．０３％、９．５１％，效果最好。

２．３．３ 酶解時(shí)間由圖３可知，酶解反應(yīng)時(shí)間對(duì)多糖損失率和蛋白去除率影響較小，為了縮短反應(yīng)時(shí)間，選擇酶解反應(yīng)時(shí)間為３０ｍｉｎ，在該條件下，其蛋白去除率和多糖損失率為６１．９８％、９．４３％，效果比較理想。

２．４ 酶法與Ｓｅｖａｇ法聯(lián)用結(jié)果將酶法與Ｓｅｖａｇ 法聯(lián)用后，蛋白去除率為７４．１８％，多糖損失率為１２．１１％，表明聯(lián)合法較單

一方法脫蛋白效果好，且多糖損失率增加不明顯。

２．５ 酶法與ＴＣＡ 法聯(lián)用脫蛋白試驗(yàn)將酶法與ＴＣＡ法聯(lián)用后，蛋白去除率為７６．３６％，多糖損失率為１１．４３％。

２．６ 不同試驗(yàn)方法的對(duì)比以蛋白去除率為主要指標(biāo)，多糖損失率為次要指標(biāo)，對(duì)上述５種方法的結(jié)果進(jìn)行比較可知（表），酶法與ＴＣＡ 法聯(lián)用蛋白去除率最高，且多糖損失率相對(duì)較低，故選擇酶法與ＴＣＡ 法聯(lián)用對(duì)猴腿蹄蓋蕨多糖進(jìn)行脫蛋白，并應(yīng)用該方法對(duì)猴腿蹄蓋蕨多糖進(jìn)行了３次脫蛋白，其蛋白去除率分別為７６．３９％、７６．４５％、７６．６７％，平均為７６．５０％，多糖損失率分別為１１．３７％、１１．６８％、１２．４０％，平均為１１．８２％。

表不同方法的猴腿蹄蓋蕨多糖的脫蛋白結(jié)果比較

蛋白去除率／％ ６３．１５　５６．２５?。叮保梗浮。罚叮怠。罚矗保?

多糖損失率／％ １４．５３?。保保常贰。梗矗场。保保福病。保玻保?

３ 結(jié)論與討論

試驗(yàn)對(duì)猴腿蹄蓋蕨多糖的脫蛋白工藝進(jìn)行了相關(guān)研究，確定了猴腿蹄蓋蕨多糖的脫蛋白工藝條件，結(jié)果表明，最佳脫蛋白工藝為酶法與ＴＣＡ法聯(lián)用，即加入０．０２ｇ木瓜蛋白酶，４０℃水浴反應(yīng)３０ｍｉｎ后，沸水中滅酶１０ｍｉｎ，冷卻至室溫，４　０００ｒ／ｍｉｎ離心，去變性沉淀，取上清液加入３％ＴＣＡ 試劑振蕩３次，每次２０ｍｉｎ，震蕩后靜置１ｈ，４０００ｒ／ｍｉｎ離心１５ｍｉｎ。在該條件下猴腿蹄蓋蕨多糖脫蛋白去除率為７６．５０％，多糖損失率為１１．８２％。該試驗(yàn)結(jié)果為猴腿蹄蓋蕨多糖的生產(chǎn)提供了理論的依據(jù)。