摘要：上海亞榮生化儀器廠在文中總結(jié)了文獻(xiàn)報道的啶酰菌胺的分析方法。 啶酰菌胺的分析主要采用高效液相色譜方法，可用于啶酰菌胺原藥、制劑和殘留物分析。

   關(guān)鍵詞：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；啶酰菌胺；高效液相色譜法；分析方法

   1  啶酰菌胺的分析方法

   啶酰菌胺采用高效液相色譜分析，紫外檢測，外標(biāo)法定量。

   1.1  操作條件

   色譜柱：250 mm×4.6 mm(i.d.)，內(nèi)填物為J’sphereODS-H80，粒徑4 μm；流動相A：水-乙腈-醋酸胺＝350 mL+650 mL+770 mg；流動相B：水-乙腈-醋酸胺＝100 mL+900 mL+770 mg；檢測波長：260 nm；流速：根據(jù)梯度；進(jìn)樣量：5 μL；柱溫：室溫(大約23 ℃)上述條件下運(yùn)行時間：26 min；保留時間：6.8 min。

   1.2  測定方法

   標(biāo)樣溶液配制：稱取啶酰菌胺標(biāo)樣100 mg(精確至0.1 mg)于100 mL容量瓶中，加入70 mL乙腈溶解，之后將容量瓶置于超聲波浴槽中脫氣5 min。 取出降至室溫后，用乙腈補(bǔ)加至刻度，搖勻。 再用移液管移取此溶液10.0 mL置于另一個50 mL容量瓶中，加入5 mL水并用乙腈稀釋到刻度，搖勻。樣品溶液的配制：稱取含有100 mg(精確至0.1 mg)啶酰菌胺樣品于100 mL容量瓶中，加入70 mL乙腈溶解，之后將容量瓶置于超聲波浴槽中脫氣5 min。 取出降至室溫后，用乙腈補(bǔ)加至刻度，搖勻。 再用移液管移取此溶液10.0 mL置于另一個50 mL容量瓶中，加入5 mL水并用乙

腈稀釋到刻度，搖勻。測定：在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序，進(jìn)行測定。

   1.3  計算方法

   將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中啶酰菌胺的峰面積進(jìn)行平均，啶酰菌胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X1(g/kg)按下式計算。

   2  啶酰菌胺的殘留分析

   高效液相色譜法測定土壤和草莓中啶酰菌胺殘留量。

   2.1  儀器與試劑

   Waters 2695高效液相色譜儀配SPD-2988檢測器，上海亞榮旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-5205。 啶酰菌胺標(biāo)準(zhǔn)品，無水硫酸鈉(用前在400 ℃烘干4 h)，乙酸乙酯、石油醚(均為分析純，需重蒸)，丙酮、二氯甲烷(分析純)；固相萃取小柱(6 mL，裝填1.0 g Florisoil)。

   2.2  色譜條件

   色譜柱：Sunfire C18 250 mm×4.6 mm(i.d.)；柱溫：30 ℃；流動相：乙腈-水(體積比為60∶40)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：207 nm；進(jìn)樣體積：10 μL。

   2.3  測定方法

   2.3.1  提取

   1)土壤：稱取土壤樣品20 g置于250 mL具塞三角瓶中，加入50 mL丙酮，震蕩1 h，將震蕩后的殘渣和溶液一起用玻璃漏斗過濾，然后將濾液用上海亞榮RE-5205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40 ℃濃縮至1~2 mL，氮?dú)獯蹈?，待凈化?

   2)草莓：稱取草莓樣品20 g置于250 mL具塞三角瓶中，加入50 mL丙酮，震蕩1 h，用布氏漏斗減壓抽濾，殘渣用20 mL丙酮洗滌(分2次)，將濾液移至分液漏斗中，分液漏斗裝有80 mL飽和氯化鈉溶液，用40、30、20 mL二氯甲烷分3次萃取，合并二氯甲烷萃取液，濾液用上海亞榮RE-5205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40 ℃濃縮至1~2 mL，氮?dú)獯蹈桑齼艋?

   2.3.2  凈化

   依次用石油醚5 mL和石油醚-乙酸乙酯(體積比7∶3)5 mL預(yù)淋Florisoil小柱，用2 mL石油醚將樣品溶解后，轉(zhuǎn)移到小柱中，用15 mL石油醚-乙酸乙酯(體積比7∶3)洗脫，洗脫液用上海亞榮生化儀器廠RE-5205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40 ℃濃縮至1~2 mL，氮?dú)獯蹈珊螅靡译娑ㄈ葜? mL，待測。

   2.4  標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍

   500 mg/L啶酰菌胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別稀釋成質(zhì)量濃度為0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、5.0 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在穩(wěn)定的色譜條件下分別進(jìn)樣10 μL，得到各質(zhì)量分?jǐn)?shù)啶酰菌胺對應(yīng)的峰面積。 由質(zhì)量分?jǐn)?shù)-峰面積繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=71 800x-216.35，r2＝0.999 9，說明啶酰菌胺在0.01~5.0 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

   2.5  方法的準(zhǔn)確度和精密度

   在土壤、草莓空白樣品中分別添加啶酰菌胺標(biāo)樣0.02、0.2、2.0 mg/kg，重復(fù)5次，在穩(wěn)定的色譜條件下，測定方法回收率。 結(jié)果表明：啶酰菌胺在土壤中的平均回收率為89.0%~94.3%，變異系數(shù)為3.72%~5.43%；在草莓中的平均回收率為92.3%~94.4%，變異系數(shù)為.64%~4.82%。

   3  啶酰菌胺的殘留分析

   氣相色譜法測定土壤和黃瓜中啶酰菌胺的殘留量。

   3.1  儀器與試劑

   Agilent 6890型氣相色譜(ECD檢測器)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，恒溫振蕩器，循環(huán)水式真空泵（上海亞榮生化儀器廠；超聲波清洗器KQ100，玻璃層析柱(20 cm×1.0 cm)等。 啶酰菌胺標(biāo)樣(純度>99%)。 乙腈、正己烷、丙酮(均為分析純)；氯化鈉(分析純)；無水硫酸鈉(分析純，450 ℃烘烤4 h)；弗羅里硅土(農(nóng)殘級)，用前經(jīng)550 ℃烘烤4 h，冷卻后加入5%水脫活。

   3.2  色譜條件

   色譜柱：HP-5，0.25 μm×0.32 mm×30 m；溫度：檢測器320 ℃，進(jìn)樣口260 ℃；柱溫采用程序升溫方式，初始溫度60 ℃，保持1.0 min，以25 ℃/min升溫至180 ℃，再以6 ℃/min升溫至200 ℃，然后以15 ℃/min升溫至260 ℃，保持8 min；氣體流量：載氣為高純氮?dú)猓髁?0mL/min，尾吹40 mL/min；分流比：采用不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣體積：2 μL；上述條件下的保留時間：啶酰菌胺18 min。

   3.3  測定方法

   3.3.1  提取

   樣品中加入20 mL乙腈(土樣則先加入5 mL蒸餾水，搖勻)，恒溫振蕩器上振蕩30 min。 向離心管中加入5.0 g氯化鈉，劇烈振搖5 min后，3 500 r/min離心5 min，取上層清液10 mL，過無水硫酸鈉后收集于150 mL濃縮瓶中，45 ℃下濃縮至近干，用10 mL丙酮-正己烷(體積比1∶9)洗殘渣，待凈化。

   3.3.2  凈化

   玻璃層析柱中加入2.0 g 5%水脫活的弗羅里硅土，上下各加入高度1 cm左右無水硫酸鈉。 用10 mL丙酮-正己烷(體積比1∶9)預(yù)淋層析柱后上樣，再用10 mL丙酮-正己烷預(yù)淋，棄去，然后用30 mL丙酮-正己烷淋洗，收集淋出液于150 mL濃縮瓶中，40 ℃濃縮至近干，用5 mL正己烷分3次洗滌濃縮瓶，置于5 mL容量瓶中，定容，待測。

   3.4  標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍

   準(zhǔn)確稱取啶酰菌胺10.0 mg，用乙腈溶解配成1.0 g/L的標(biāo)準(zhǔn)母液。 將標(biāo)準(zhǔn)母液分別用正己烷稀釋配成0.05、0.10、0.20、0.40、0.50 mg/L的工作溶液，分別進(jìn)樣分析，以進(jìn)樣量(ng)為橫坐標(biāo)、峰高(Hz)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y=56 789x-2 978.5，r2＝0.993 2，說明啶酰菌胺在0.05~0.5 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

   3.5  方法的準(zhǔn)確度和精密度

   在黃瓜和土壤的空白樣品中，分別添加啶酰菌胺工作溶液，使其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05、1.0、5.0 mg/kg。 在添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)范圍內(nèi)，黃瓜中啶酰菌胺回收率為92.16%~98.32%，變異系數(shù)分別為4.59%~8.31%；土壤中啶酰菌胺的回收率為89.46%~99.23%，變異系數(shù)分別為3.48%~6.15%。