1材料與方法
1.1 材料及儀器
1.1. 1 丙烯酞胺
1.1.2 雙丙烯酞胺
1.1.3 過硫酸按
1.1.4 四甲基乙二胺
1.1.5 十二烷基硫酸鈉
1.1.6 牛清血蛋白
1.1.7 曙紅Y
1.1.8 甲醇
1.1.9 冰醋酸
1.1.10 電極緩沖條
1.1.11 電泳槽
1.1.12 P o w E R 1 5 0 三恒電源
1.2 方法
1. 2.1 樣品制備 將加有s D s 的樣品溶液在10 ℃ 水浴中保溫5而n , 冷卻后在2 5 鄰l 樣品加1。閃澳酚藍(0.01 % ) 和10 川二硫蘇糖醉。
加樣前充
分混合溶液。
1 .2 2 制備凝膠板7.5% 聚丙烯酞胺凝胺(T = 7.5%,c ~2.6% ) 含S D S O. 28 的膠3 0m l 灌注1 2 5 義2 5 0~ 硅化玻璃板上, 待聚合后使用。
1 .2 3 加樣將凝膠板水平放置電泳槽冷卻板上, 距陰極側(cè)1、5 一2.oc m 處加樣品。
1 .2 4 電泳待樣品完全滲入凝膠后, 將充滿緩沖液的電極緩沖條水平放在凝膠板的兩極, 與電極緊密接觸, 電流30 mA, 電泳1 0min , 溫度為5~ 6 ℃ 。
1.2.5 曙紅Y 染色電泳結束后立即將凝膠浸入冰醋酸一甲醇混合液中( 10 % 冰醋酸,40 % 甲醇), 室溫下振蕩浸泡1 0而n ; 凝膠用蒸餾沖洗l 而山然后放置梁色液中(1 寫曙紅Y, 切% 甲醇,0.5~ 0.5 %醋酸混合后過濾, 用前臨時配制) ,室溫下振蕩染色sm in。染色后的凝膠蒸餾水沖洗s m in ; 再放入冰醋酸一甲醇混合掖中10 秒, 取出用蒸餾水沖洗二次, 即可見清楚的顯色帶.
2 結果
血清樣品經(jīng)SSD 一P A G E 電泳, 曙紅Y染色與考馬斯藍染色靈敏度比較, 結果顯示本法所得電泳圖譜優(yōu)于考馬斯亮藍。將牛血清血蛋白稀釋成300ng、200ng、10 0 ng、5 0ng、2 5ng、15 ng、1 0ng、5ng最低檢測靈敏度試驗, 其極限值為1如名左右。明顯好于考馬斯亮藍染色法。
3 討論曙紅Y 是一典型的四澳熒光素, 在酸性條件下, 轉(zhuǎn)變成為二氫熒光素。
它的芳香環(huán)與蛋白質(zhì)的基團間的琉水相互作用及經(jīng)基與蛋白質(zhì)膚鏈間形成氫鍵而使蛋白質(zhì)染色。不僅能與一般蛋白質(zhì)染色, 也能與糖蛋白質(zhì)染色。
本法采用水平薄層聚丙烯酸胺凝膠電泳, 加樣數(shù)量多, 同時有利相互比較等優(yōu)點同時采用電極緩沖條既方便又節(jié)省大量配制電極緩沖液。曙紅丫染色系新近發(fā)展起來的一種蛋白質(zhì)快速染色法, 靈敏度好, 操作簡便, 染色時間短, 試劑便宜, 值得推廣應用。
