茶多酚( tea polyphenols，TP) 是從茶葉及其副產(chǎn)品中提取的天然抗氧化劑，是以α－苯基苯并吡喃為結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)的類黃酮復(fù)合物，具有抗氧化、抗菌、抗病毒，改善畜禽生產(chǎn)性能和產(chǎn)品品質(zhì)等功能。TP 有極強(qiáng)的抗氧化活性，可提供氫離子( H+ )與超氧陰離子自由基( ·O－2) 、羥自由基( ·OH) 、羧自由基( ＲOO·) 和硝基自由基( ·ONOO－ ) 等自由基結(jié)合形成惰性化合物，終止自由基鏈?zhǔn)椒?/span>應(yīng); 同時(shí)可螯合鐵離子( Fe3+ ) 以抑制芬頓( Fenton)反應(yīng)中·OH 的產(chǎn)生。攝入多酚類物質(zhì)能維持體內(nèi)氧化－還原穩(wěn)態(tài)，提高超氧化物歧化酶( SOD) 、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶( GPx) 、過(guò)氧化氫酶( CAT) 和谷胱甘肽還原酶( GＲ) 等抗氧化酶活性，以抑制局部或全身性炎癥反應(yīng)，刺激核轉(zhuǎn)錄因子( Nrf2) 活化，上調(diào)細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶表達(dá)水平。研究表明，飼糧中添加TP 可改善機(jī)體和禽蛋的抗氧化狀態(tài)。玉米飼糧中添加120 mg /kg TP 能顯著提高肉鴨生長(zhǎng)性能和血清抗氧化水平，其改善效果優(yōu)于維生素E 和二丁基羥基甲苯( BHT ) ;100 ～ 200 mg /kg TP 能延緩雞蛋在儲(chǔ)藏過(guò)程中哈夫單位的降低，降低蛋黃膽固醇和丙二醛( MDA)含量; 飼糧中含400 mg /kg 白藜蘆醇( 又稱芪三酚) 能降低鵪鶉血清和蛋黃中硫代巴比妥酸反應(yīng)物( TBAＲS) 含量，提高血清維生素E 濃度。然而，TP 在動(dòng)物應(yīng)用中的量效關(guān)系上缺乏系統(tǒng)性研究，其在蛋雞飼糧中的推薦使用劑量及用量上限鮮見(jiàn)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在研究飼糧中不同水平TP 對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)及血液、肝臟和蛋黃的抗氧化能力的影響，探討TP 在蛋雞飼糧中的適宜添加劑量，為實(shí)際生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

材料與方法

試驗(yàn)材料

  TP 由無(wú)錫太陽(yáng)綠寶科技有限公司提供( 純度≥80%，批次號(hào): 505083) 。采用《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測(cè)方法》( GB /T 8313—2008) 檢測(cè)，TP 含量為66．73%，兒茶素為37．25%。試驗(yàn)飼糧中TP 以此實(shí)測(cè)結(jié)果為依據(jù)添加，逐級(jí)混合到配合飼料中。

試驗(yàn)動(dòng)物與飼糧

  試驗(yàn)選用450 只24 周齡的健康海蘭灰產(chǎn)蛋雞，采用單因子完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，將試驗(yàn)雞分為5 個(gè)組，每組6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15 只雞。試驗(yàn)包括預(yù)試期7 d、正試期56 d。在基礎(chǔ)飼糧( 表2) 中分別添加0、40、80、200 和400 mg /kg 的TP 構(gòu)成試驗(yàn)飼糧。

飼養(yǎng)管理

  采用半開放式雞舍3 層立體籠養(yǎng)，自然光照加人工補(bǔ)光，光照時(shí)間16 h /d、光照強(qiáng)度16 lx，相對(duì)濕度50%～ 90%，自然通風(fēng)結(jié)合縱向負(fù)壓通風(fēng)。飼喂干粉料，自由采食和飲水，每天布料、勻料、撿蛋、清糞各2 次，每周消毒1 次。常規(guī)防疫和管理。

指標(biāo)測(cè)定與方法

樣品采集與制備

  正試期，每天按重復(fù)記錄產(chǎn)蛋數(shù)、稱蛋重，計(jì)算平均蛋重和產(chǎn)蛋率。每2 周以重復(fù)為單位計(jì)算平均日采食量和料蛋比。分別于正試期的第2、4、6 和8 周末，每重復(fù)采4 枚蛋，測(cè)定蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋白高度、哈夫單位、蛋黃顏色和蛋形指數(shù)。于正試期的第4 和8 周末，每組隨機(jī)選取體重相近的蛋雞，空腹無(wú)菌翅靜脈采血，3 000 r /min 離心10 min 制備血漿，－20 ℃保存，待測(cè)血漿抗氧化指標(biāo)。8 周末，每組隨機(jī)選取體重相近的蛋雞，屠宰，摘取肝臟，液氮保存待用。組織勻漿的制備: 將肝臟用生理鹽水沖洗，除去血液，濾紙吸干，稱取約0．5 g，加9 倍生理鹽水，剪碎，置勻漿機(jī)中制成10% 的組織勻漿，3 000 r /min離心10 min，取上清液，－20 ℃保存待測(cè)，備檢肝組織抗氧化指標(biāo)。

測(cè)定方法

  蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋白高度、哈夫單位和蛋黃顏色采用以色列OＲKA 公司生產(chǎn)的系列雞蛋品質(zhì)測(cè)定儀測(cè)定; 蛋形指數(shù)采用日本富士坪公司生產(chǎn)的蛋形指數(shù)測(cè)定儀測(cè)定，蛋黃和蛋殼重量采用萬(wàn)分之一天平測(cè)定; 總超氧化物歧化酶( T-SOD) 活性采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定; MDA 含量采用硫代巴比妥酸( TBA) 法測(cè)定; GPx 活性和總抗氧化能力( T-AOC) 采用比色法測(cè)定。所用試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

數(shù)據(jù)處理

  試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。數(shù)據(jù)采用SPSS 19．0 單因素方差分析( one-way ANOVA)程序進(jìn)行方差分析，采用Duncan 氏法進(jìn)行多重比較。TP 添加水平的線性和二次線性效應(yīng)采用正交多項(xiàng)式進(jìn)行分析。以P＜ 0．05 為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

結(jié)果與分析

TP 對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

  與對(duì)照組相比，飼糧中添加TP未顯著影響產(chǎn)蛋率和平均日采食量( P＞0．05) 。平均日采食量在試驗(yàn)后期( 4 ～ 8 周) 和試驗(yàn)全期( 1 ～8 周) 隨TP 添加水平升高呈二次曲線變化( P ＜0．05) 。與對(duì)照組相比，飼糧中添加TP 對(duì)平均蛋重和料蛋比影響較為明顯。試驗(yàn)前期( 1 ～ 4 周) ，隨著TP 添加水平的升高，平均蛋重線性降低( P＜0．05) ，400 mg /kg 組平均蛋重顯著低于對(duì)照組和40 mg /kg 組( P＜0．05) ; 各組平均蛋重在試驗(yàn)后期及全期無(wú)顯著差異( P＞0．05) ，但平均蛋重在試驗(yàn)后期隨TP 添加水平升高呈二次曲線趨勢(shì)變化( P＜0． 05) 。試驗(yàn)前期，各組料蛋比無(wú)顯著變化( P＞0．05) ; 試驗(yàn)后期，料蛋比隨TP 添加水平升高呈二次曲線變化( P＜0．05) ，其中200 mg /kg 組料蛋比顯著低于對(duì)照組( P＜ 0．05) ，其他TP 組與對(duì)照組無(wú)顯著差異( P＞0．05) 。整個(gè)試驗(yàn)期，料蛋比隨TP 添加水平升高先降低后升高，200 mg /kg 組料蛋比最佳。