樣品中的VC 用偏磷酸鈉提取，經(jīng)2，6—二氯靛酚氧化成脫氫型抗壞血酸后與鄰苯二胺( OPDA)反應(yīng)，生成具有熒光的喹喔啉( quinoxaline) ，其熒光強(qiáng)度與脫氫抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比，以此測(cè)定臘肉中VC 含量。熒光分光光度計(jì)在激發(fā)波長(zhǎng)360nm，發(fā)射波長(zhǎng)430nm 測(cè)定喹喔啉熒光強(qiáng)度。該方法VC 的檢出限為0. 95mg·kg － 1 ，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差( RSD) 2. 4%，回收率在87. 2% ～ 94. 3%之間。用熒光分光光度計(jì)法和2，4 － 二硝基苯肼比色法同時(shí)測(cè)定臘肉中VC，發(fā)現(xiàn)二者結(jié)果無(wú)顯著差異，但熒光分光光度計(jì)法精密度高于2，4 － 二硝基苯肼比色法。實(shí)驗(yàn)證明，熒光分光光度計(jì)法測(cè)量臘肉中VC 具有靈敏度高、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。

關(guān)鍵詞: 維生素C; 臘肉; 熒光分光光度計(jì)法; 2，4 － 二硝基苯肼比色法

VC 為人體必需的營(yíng)養(yǎng)成分，在維持血管彈性，減低毛細(xì)血管脆性，增加人體的抵抗力方面具有重要作用，可用于壞血病的預(yù)防及治療。由于VC 能明顯改善肉類品質(zhì)( 如肉的顏色、吸水力等) ，故飼料中往往添加VC，導(dǎo)致肉及肉制品中常含有低量的VC。目前，食品中VC 測(cè)定主要方法有: 2，4 － 二硝基苯肼比色法、紫外分光光度法、近紅外分光光度法、電化學(xué)法、高效液相色譜法、碘量化等，而用熒光分光光度計(jì)法測(cè)定肉制品中VC 報(bào)道較少。滴定法、紫外分光光度法、電化學(xué)法等檢出限高、操作復(fù)雜，時(shí)間長(zhǎng)，測(cè)試條件較為嚴(yán)格。由于肉類中VC 含量一般都較低，故本實(shí)驗(yàn)選用熒光分光光度計(jì)測(cè)定臘肉中VC，實(shí)驗(yàn)證明該方法靈敏度高，快速簡(jiǎn)便，測(cè)試條件允許范圍較寬，結(jié)果令人滿意。

實(shí)驗(yàn)部分

1. 1 儀器與試劑

熒光分光光度計(jì)［F － 7000 ( 日立公司) ］;DHG － 9241A 恒溫培養(yǎng)箱( 上海賀德實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司) ; 抗壞血酸( 分析純，天津市永大化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心) ; 偏磷酸、乙酸鈉( 分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司) ; 硫脲( 分析純，上海精析化工科技有限公司) ; 硼酸( 分析純，上海申博化工有限公司) ; 2，6—二氯靛酚、鹽酸鄰苯二胺( 分析純，中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司) 。

實(shí)驗(yàn)方法

1. 2. 1 樣品前處理

精確稱取勻漿后的臘肉2 ～ 5g 置于燒杯中，加入20mL 50g·L － 1 偏磷酸，超聲20min 后，過(guò)濾至100mL 棕色容量瓶中，用50g·L － 1偏磷酸定

容。吸取濾液1. 00mL 于試管中，加入0. 10mL 2g·L － 1二氯靛酚( 使VC 氧化成脫氫VC) ，混勻( 此時(shí)溶液呈微紅色) 。再加入0. 10mL 30g·L － 1硫脲搖勻，使紅色褪去( 還原過(guò)量的二氯靛酚) 。向試管中加入1. 00mL 3%硼酸—50% 乙酸鈉，搖勻，室溫下靜置15min。在暗室中迅速向試管中加入5. 00mL 0. 2g·L － 1鹽酸鄰苯二胺，搖勻，在室溫下反應(yīng)30min。同時(shí)做試劑空白。

抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液

準(zhǔn)確稱取60℃真空干燥2h 的0. 0500g 抗壞血酸，用50g·L － 1偏磷酸溶解并定容至50mL 棕色容量瓶中，即為1mg·L － 1 的抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。用偏磷酸逐級(jí)稀釋，配置成0、0. 2、1、5、10、20mg·L － 1標(biāo)準(zhǔn)溶液，其余步驟同樣品前處理。

1. 2. 3 熒光光度計(jì)參數(shù)條件

測(cè)量模式: 光度測(cè)量法，激發(fā)波長(zhǎng)350nm，發(fā)射波長(zhǎng)430nm，積分時(shí)間0. 1s，延遲時(shí)間按0. 1s，激發(fā)波長(zhǎng)狹縫寬度5. 0nm，發(fā)射波長(zhǎng)狹縫寬度5. 0nm，光電倍增管電壓250V。